骨髄移植後に出現するT細胞分画のPCRと温度勾配ゲル電気泳動法によるクローン解析

使用 PCR 和温度梯度凝胶电泳对骨髓移植后出现的 T 细胞组分进行克隆分析

• 批准号: 05670902
• 负责人: 小林 幸夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670902/
• 关键词: TCR(T細胞抗原受容体); PCR; 温度勾配電気泳動; 遺伝子診断; 骨髄移植

各種疾患をT細胞のレパートリィの面から検討する目的で,PCRと温度勾配ゲル電気泳動(Temperature gradient gel electrophoresis,TGGE)法による新しいクローン解析法の導入を試みた.T細胞の抗原受容体γ鎖遺伝子V領域・J領域で共通プライマーオリゴマーが設定可能である部位を探し,そのオリゴマーセットを用いてPCRを行なった後に,65-85度の温度勾配をかけてTGGEを4時間250Vで行なった.遺伝子再構成があることが判明しているT細胞性白血病細胞株,および臨床検体で単一なバンドが検出されたが,通常の健常人末梢血のDNAではsmearしか認めなかった.白血病細胞の検出感度は0.1-1%であった.連続希釈した検体でPCR産物の塩基配列を検討したところ,正常リンパ球に由来する再構成塩基配列をバックグラウンドとして含んでいたことから,高感度で単クローン性の腫瘍細胞を検出することができた理由は,オリゴマーの特異性が腫瘍細胞の再構成遺伝子の増幅に有利であったためではなく,PCR産物のDNA断片がサイズと塩基組成の相違によって分離できたためであると結論した.すなわち,バックグラウンドの塩基組成が異なる再構成産物は拡散により消失し,クローン性の再構成バンドだけが明瞭に観察されたと考えられた.各種疾患での検討では,成人T細胞性白血病・リンパ腫の症例で末梢血液に異型細胞が出現していないにもかかわらず,この方法によってはじめて腫瘍細胞クローンの存在が示された例があった.従来のT細胞クローンのPCR法による臨床検体の解析では,正常リンパ球に由来するバックグラウンドの再構成産物も同様に増幅され,クローン性の再構成と区別できない欠点があったが,本法によりその点が解決された.現在までのところ骨髄移植後で異常クローンが出現した症例は認めていないが,症例を増やして検討中である.

A variety of diseases T cell proliferation and expression of the surface of the target,PCR and temperature coordination of electrical mobility (Temperature gradient gel electrophoresis,TGGE) method for the introduction of new T-cell antigen receptor γ-lock gene V field J field to set the possible site to explore, all right to use PCR after the implementation 65-85 ° C temperature setting TGGE 4 time 250V line. T-cell leukemia cell lines are identified by DNA recombination, and the DNA of normal human peripheral blood is detected in clinical specimens. Leukemia cell sensitivity is 0.1-1%. The gene alignment of PCR products in the same sample was discussed. The gene alignment of normal samples was discussed. The gene alignment of high sensitivity samples was discussed. The gene alignment of high sensitivity samples was discussed. The gene alignment of high sensitivity samples was discussed. DNA fragments of PCR products were isolated and analyzed. The composition of the base of the compound is different, and the reconstituted product is dispersed and disappeared. Various diseases are discussed, adult T cell leukemia, multiple cases of tumor, peripheral blood atypical cells appear, this method is used to detect the presence of tumor cells. The PCR method of T cell proliferation in the future was used to analyze clinical samples. The PCR method was used to analyze the origin of normal T cell proliferation and the recombination products of T cell proliferation. Now, after bone transplantation, abnormal symptoms appear, and symptoms increase.

项目成果

Okamoto,S.et al.: "Allogeneic bone marrow transplantation in Japan." Bone Marrow Transplant. in press (1994)

Okamoto,S.et al.：“日本的同种异体骨髓移植。”

Ozawa,K.et al.: "Hematopoiesis-supporting ability of a differentiaiton-inducible stromal cell line of mouse embryo fibroblasts." Bone Marrow Transplant. 12(S2). 29 (1993)

Ozawa,K.et al.：“小鼠胚胎成纤维细胞的分化诱导基质细胞系的造血支持能力。”

Kobayashi,Y et al.: "HRX rearrangement in acute lymphoblastic leukemia after adjuvant chemotherapy of breast cancer." Blood. 82. 3201-3202 (1993)

Kobayashi,Y 等人：“乳腺癌辅助化疗后急性淋巴细胞白血病中的 HRX 重排。”

Nishikawa,M.et al.: "Changes in hematopoiesi-supporting ability of C3H10T1/2 mouse embryo fibroblast during differentiation." Blood. 81. 1184-1192 (1993)

Nishikawa,M.et al.：“C3H10T1/2 小鼠胚胎成纤维细胞分化过程中造血支持能力的变化。”

Kobayashi,Y et al.: "Detection of tumor clones with PCR and TGGE(Temperature gradient gel electrophoresis)." Int J Hematol. 57(S). 101 (1993)

Kobayashi,Y 等人：“用 PCR 和 TGGE（温度梯度凝胶电泳）检测肿瘤克隆。”