PT-PCR法を用いた破骨細胞形成系に関する分子薬理学的研究

PT-PCR法对破骨细胞生成系统的分子药理学研究

• 批准号: 05671562
• 负责人: 戸苅 彰史
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Aichi Gakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05671562/
• 关键词: HL-60; GTP-シクロヒドロラーゼI; 活性型ビタミンD_3; インターフェロン-gamma; TPA; レチノイン酸; RT-PCR; mRNA

本研究は、活性型ビタミンD3により単球に、TPAによりマクロファージに、レチノイン酸により顆粒球に、更に扁平上皮癌の細胞株(MH-85)のconditioned mediumにより破骨細胞に分化する能力を有するヒト前骨髄細胞様細胞株(HL-60)を用いて、この細胞が単球.マクロファージ、破骨細胞へと分化する過程におけるビオプテリンおよびGTP-シクロヒドロラーゼI(GTP-CHI)の生理的役割を分子薬理学的に検討すると共に、三種の多形の存在が指摘されているGTP-CHIの三種のmRNAの存在比率をこれら血液細胞において検討する事を目的としていた。10%牛胎児血清を含むRPMI1640溶液中5%CO_2存在下,37℃にて3日間培養したHL-60細胞は、活性形ビタミンD_3(1-100nM)、インターフェロン-gamma(1000u/ml)、TPA(100nM)あるいはレチノイン酸(10-1000nM)添加により、それぞれ単球.マクロファージおよび顆粒球に分化した。これら分化したHL-60細胞よりmRNAをAcid Guanidinium Thiocyanate-Phenol-Chroloform (AGPC)法により抽出し、これら細胞に発現しているGTP-CHIのmRNAをReverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction(RT-PCR)法にて検出し、それぞれの細胞におけるGTP-CHIの三種のmRNAの存在比率を調べた。その結果HL-60細胞にも肝臓において見いだされた様にGTP-CHIの三種のmRNAの存在が確認できた。また、このGTP-CHIの三種のmRNAの発現は活性型ビタミンD_3(1-100nM)およびインターフェロン-gamma(1000u/ml)により著しく誘導された。一方、TPA(100nM)はこの三種のmRNAの誘導を抑制した。これらの観察より、GTP-CHIのmRNAがこれら血液細胞においても三種存在すること、およびこのGTP-CHIのmRNAが血液細胞の分化に関連している可能性が示された。現在、これら分化したHL-60細胞のホモジネートを作製し、ネオプテリンおよびビオプテリン量、GTP-CHI活性を測定している。

In this study, the active cell line (D3), the TPA cell line (HL-60), the cell line of flat epithelial carcinoma (MH-85), the cell line of flat epithelial carcinoma (MH-85), the cell line of osteoclast (HL-60), the cell line of preosseous bone cell (HL-60), and the cell line of flat epithelioma (CEC). The process of differentiation and differentiation of bone marrow and osteoclast cells involved in the process of differentiation of bone marrow cells. There is a general understanding of the molecular physiology of GTP-CHI, the existence of three kinds of polymorphisms, the existence rate of three kinds of mRNA, the ratio of blood cells and blood cells, the ratio of blood samples, the number of cells, and the purpose of mRNA. In the presence of 10% bovine fetal serum containing 5%CO_2 in RPMI1640 solution, HL-60 cells were cultured at 37 ℃ for 3 days, active 100nM D3 (1-100nM), gamma (1000u/ml), TPA (100nM) were added with the addition of thiazolyl acid (10-1000nM). There is no difference in the differentiation of granule balls. Differentiation of HL-60 cells and mRNA Acid Guanidinium Thiocyanate-Phenol-Chroloform (AGPC) methods to determine the existence rates of the three kinds of mRNA, GTP-CHI cells mRNA cells Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR), cell cultures and GTP-CHI cells, were analyzed. The results showed that there were confirmation errors in the three types of mRNA of HL-60 cells, such as liver cancer, liver cancer, and GTP-CHI. The active mRNA D3 (1-100nM) was detected in three kinds of mRNA, namely, gamma (1000u/ml) and D3 (1-100nM). One party, TPA (100nM), three-party mRNA leader, suppresses the device. The possibility of cell differentiation in the presence of three types of blood cells, such as GTP-CHI, GTP-CHI, mRNA, and mRNA, indicates the possibility of cell differentiation. Now, we need to differentiate the HL-60 cells and determine the activity of GTP-CHI.