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ペプチド性薬物の超微量測定システムに関する研究

多肽类药物超痕量检测系统的研究

基本信息

批准号：
05671778
负责人：
今井一洋
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ペプチド性薬物の超微量測定を可能にするために,従来用いられているHPLC-過シュウ酸エステル化学発光検出法の高感度化を検討した.その結果,発光試薬溶媒である酢酸エチル-アセトニトリル系混合溶媒に,フタル酸エステル誘導体の一つであるフタル酸ジオクチルを最適量添加することにより,発光強度には影響をあたえずノイズのみを低下させることによってS/Nを上昇させることが可能となり過シュウ酸エステル化学発光検出法の高感度化を可能にした.2.生体由来のペプチドのHPLCによる分離分析にはトリフルオロ酢酸を含む酸性溶離液が汎用される.しかし過シュウ酸エステルを用いた化学発光反応は中性付近に最適なpHが存在する.そこで,ポストカラムで溶離液のpHを中和することにより反応コイル内の最適な発光を得るために,3方向流入型回転流型混合器を検出系に導入した.これにより酸性溶離液を用いても高感度にペプチド性薬物を検出可能な系を確立した.3.以上のようにして得られた最適条件を利用して,ブラジキニンをダンシルクロリドにより蛍光誘導体化した後HPLC-過シュウ酸エステル化学発光検出法で分離検出した.ブラジキニンの検出限界は5fmol/inj(S/N=2)であった.次に既知量のブラジキニンを血清10μlに添加しBond Elut-CNカラムを用い抽出し検量線を作成した結果,43〜430fmol/injの範囲で原点を通る直線となった(r=0.998),検出限界は11fmol/inj,抽出率は90.4%であり,この方法によりブラジキニン等のペプチド性薬物の超微量測定が可能であることが示された.

1. Study on the possibility of ultra-micro determination of selected compounds by HPLC-HPLC and high sensitivity chemical detection method. As a result, the light test solvent is a mixed solvent, and the optimum amount of light test solvent is added to the mixed solvent. 2. The origin of living organisms and the separation and analysis of living organisms by HPLC. The optimum pH for chemical reactions to light and neutral substances is present. The pH of the solution is neutralized by a three-way inflow recirculation mixer. 3. The optimum conditions were obtained by using the HPLC-HPLC method.ブラジキニンの検出限界は5fmol/inj(S/N=2)であった. For the next known quantity, the range of 43 ~ 430fmol/inj is 10μl, and the extraction rate is 90.4%.