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ステロイド水酸化酵素系における基質構造認識と水酸化反応機構と解析

类固醇羟化酶系统的底物结构识别及羟化反应机理及分析

基本信息

批准号：
05680560
负责人：
鍔木基成
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Himeji Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々はシトクロムP450scc,P450camに対する一連の酵素化学的、生物物理学的測定によりその基質結合部位におけるヘム活性中心と基質との間の立体特異的相互作用について明らかにしてきた。今年度の研究成果は次のとうりである。1精製した酸化型P-450cam酵素に基質が結合すると通常のlow-spin EPR siganlとは違うタイプの信号が現れることを見いだした(本年度生化学会、生物物理学会にて発表)。さらに一酸化窒素(NO)を結合させその光解離型EPRスペクトルを解析することにより活性中心付近における基質とヘムとの間の微細な立体構造情報を得ることができた。2副腎皮質より精製した酸化型P-450c21に基質であるprogesterone,17alpha-hydroxy progesteroneが結合した場合に、P-450camと基質が結合した場合と全く同じタイプのEPR signalが出現することがわかった。さらに20beta-hydroxyprogesteroneが結合した場合にも同様なEPR signalが強く現われることがわかった。すなわちこの新しいタイプのEPR signalはそのP-450酵素と複合体を作りうる基質アナログがその酵素により部位特異的モノオキシゲナーゼ反応を受けるような基質かどうかを判定する非常に有効な指標である可能性があると考えられた。3事実、再構成系による活性測定によりステロイド21位水酸化反応のみ行っていると思われていたP450c21がこの20beta-hydroxyprogesteroneに対する20位オキシダーゼ反応を行っていることを新たに見いだした。しかもその反応速度は従来から知られているprogesterone,17alpha-hydroxyprogesteroneに対する21位水酸化活性とほぼ同じ程度であった。

We express our interest in the interaction of enzyme chemistry, biophysics, enzyme chemistry, enzyme chemistry, biophysics, The results of this year's research have been awarded for the first time. 1. The combination of acidified P-450cam enzyme gene and low-spin EPR siganl enzyme is usually used. The signal is different from that of the biochemical society and the biophysical society. The combination of acidulated asphyxiant (NO) and photolysis type EPRL was used to analyze the active center of EPRL. The active center was close to the active center. Two pairs of skin samples were detected by acidified P-450c21 gene progesterone,17alpha-hydroxy progesterone combined with P-450cam gene combination, and by using the same EPR signal. The combination of the 20beta-hydroxyprogesterone and the EPR signal will help you to make sure that you don't know what to do. The new EPR signal enzyme complex is used to detect the possibility that the enzyme is specific to the site of the enzyme. 3. In the adult system, the activity test was used to determine the activity of the 21-bit acidified water. This is the first step in the process of acidizing water. This is the first step in the process of acidification of water. This is the first step in the process of acidification of water. This is the first step in the process of acidification of water. This is the first step in the process of acidification of 21-bit water. This is the first step in the process of acidification of 21-bit water. This is the first step of the process. We need to know that the acidizing activity of 21-position water is the same as that of the same degree of water acidification. In this way, we should know that the acidification activity of 21-position water is the same as that of progesterone,17alpha-hydroxyprogesterone.