魚類ステロイドホルモンの酵素免疫測定法の開発と応用

鱼类甾体激素酶联免疫分析法的研制及应用

• 批准号: 07660258
• 负责人: 朝比奈 潔
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07660258/
• 关键词: ELISA; ステロイド; 魚類; 20β-S; 卵成熟

96穴マイクロタイタ-プレートと固層化第2抗体を用いた酵素免疫測定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)を,魚類の卵成熟誘起ステロイドの一種である17α,20β,21-trihy-droxy-4-pregnen-3-one(20β-S)について試作した.抗原の標識にはhorse radish peroxidaseを用い,ステロイドのハプテン化,及び酵素との結合にはコハク酸カルボジイミド法を用いた.試作した測定系を検討した結果,本測定系は従来用いられてきた放射免疫測定法(RIA)とほぼ同程度の感度および精度を持つことが明らかとなった.本法は安全性や迅速性などの面でも利点をもつため,充分,RIAに置き換わりうると考えられる.20β-Sと同様に魚類の卵成熟誘起ステロイドである17α,20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one,)魚類の副腎皮質ホルモンであるコルチゾル,魚類の雄性ホルモンである11-ketotestosteroneについてもほぼ測定系が完成し,現在,有効性の検定を行っている.今後,魚類生殖系解析に関連したさまざまな研究に応用していく予定である.ある種の魚類では卵成熟時に生殖腺の5β-reductase活性が上昇することがわかっているが,その結果産生される5β-還元体のステロイドは,その生理活性に不明の点が多い.5β-還元体の一種である5β-pregnane-3-17-dioneについてもELISA測定系を試作し,一応,測定可能となった.しかしながら,ステロイドの構造上の問題から抗体の特異性が低く,17α-hydoroxyprogesteroneと50%近く交差することがわかった.17α-hydoroxyprogesteroneは魚類血中にかなりの濃度で存在するため測定には前もって高速液クロなどで5β-pregnane-3-17-dioneを分離する必要があり,より特異性の高い抗体ができないか目下検討中である.

96-point enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was used to test the 17α,20β,21-trihy-droxy-4-pregnen-3-one(20β-S)-induced maturation of fish eggs. Antigen identification is used in horse radish peroxidase, and enzyme binding is used in horse radish peroxidase. The results of this assay were compared with those of radioimmunoassay (RIA). The sensitivity and accuracy of RIA were similar to those of RIA. The method is safe, rapid, and efficient. The method is sufficient, and the method is ready for testing. 20 β-S and isoform fish egg maturation induction is completed. Now, the method is ready for testing. In the future, the relationship between fish reproductive system analysis and research should be determined. 5β-reductase activity in gonads of fish species increased during egg maturation, resulting in the production of 5β-reductants. There were many unknown points in physiological activity of 5 β-reductants. 5 β-pregnane-3-17-dione ELISA was used to determine the possibility of 5 β-reductants. The structure of the antibody was found to be low in specificity, and the concentration of 17 α-hydroroxyprogesterone in fish blood was found to be 50%.

项目成果

Akira Kambegawa: "The biotinylation of steroids and an elisa by the biotin-avidin method" Proc. Japan Soc. Comp. Endocrinol.10. 63 (1995)

Akira Kambekawa：“通过生物素-亲和素方法对类固醇和酶联免疫吸附进行生物素化”Proc。

Kiyoshi Asahina: "Development of a microtiter plate enzyme-linked immunosorbent assay for 17a, 20b-21-trihydroxy-4-prengnen-3-one, a teleost gonadal steroid" Fisheries Science. 61. 491-494 (1995)

Kiyoshi Asahina：“开发一种微量滴定板酶联免疫吸附测定法，用于测定硬骨鱼性腺类固醇 17a, 20b-21-三羟基-4-prengnen-3-one”，《渔业科学》。

Kiyoshi Asahina: "Changes of plasma steroid profiles during the annual reproductive cycle of the female flounder, Platichthys flesus: Identification and quantification by gas chromatography-mass spectrometry" Journal of Fish Physiology and Biochemistry. (

Kiyoshi Asahina：“雌性比目鱼 Platichthys flesus 每年繁殖周期中血浆类固醇谱的变化：通过气相色谱-质谱法进行鉴定和定量”《鱼类生理学与生物化学杂志》。