組換えウイルスを用いたウマヘルペスウイルス1型の病原性遺伝子の解析

利用重组病毒分析马疱疹病毒1型致病基因

• 批准号: 07660410
• 负责人: 桐澤 力雄
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Rakuno Gakuen University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07660410/
• 关键词: 組換えウイルス; ウマヘルペスウイルス1型; DNA; 71番遺伝子

ウマヘルペスウイルス1型(EHV-1)の強毒HH1株をウシ腎臓(BK)細胞で長期間連続的に継代して弱毒化されたBK343株では1番遺伝子(機能不明)、24番遺伝子(テグメントタンパク)および71番遺伝子(膜糖タンパク)に変異のあることをこれまでの研究で明らかにした。本研究では71番遺伝子の変異と病原性との関連を調べるために3種類の71番遺伝子の組み換えウイルスを作出して、その病原性をマウスモデルを用いて解析した。組み換えウイルスは相同組み換えにより、HH1株の71番遺伝子内にβ-ガラクトシダーゼ(β-gal)遺伝子を挿入したもの(β-71株)とβ-71株の71番・β-gal結合遺伝子をBK343株の71番遺伝子あるいはHH1株の71番遺伝子に置き換えたもの(それぞれ、3F-71株,Res-71株)を作出した。これらのウイルスの生物性状を培養細胞を用いて検討したところ、ウイルス複製に大きな差はみられないものの、β-71株の細胞外へのウイルス放出量の減少傾向がみられた。また、組み換えウイルスのプラック形成能は、株化ウマ皮膚(E. Derm)細胞を用いるとすべてHH1株と同様であったが、BK343株ではプラックサイズは小さかった。これらのウイルスをマウスに経鼻接種し、マウス肺でのウイルス感染価を測定したところ、β-71株とBK343株の感染価はHH1株の約1/100であったが、3F-71株とRes-71株の感染価はHH1株とほぼ等しかった。以上の成績より、71番遺伝子産物は病原性に関与することが示唆された。しかし、HH1株の71番遺伝子をBK343株の71番遺伝子に置き換えた3F-71株では増殖能の低下が認められなかったことから、BK343株の病原性低下には71番遺伝子の変異以外の要因も関与していることが示唆された。現在、1番遺伝子と24番遺伝子について同様の検討を進めている。

ウ マ ヘ ル ペ ス ウ イ ル ス type 1 (EHV) の strong poison HH1 strains を ウ シ で long-term renal perforatien (BK) cells between even 続 に 継 generation し て weak poison さ れ た BK343 strains で は 1 heritage 伝 unknown (function), 24 times heritage 伝 child (テ グ メ ン ト タ ン パ ク) お よ び 71's legacy 伝 child (membrane sugar タ ン パ ク) に - different の あ る こ と を こ れ Youdaoplaceholder0 まで studies で Ming ら に に た. This study で は 71's legacy 伝 son の - different と pathogenicity と の masato even を adjustable べ る た め に 3 kinds の 71 times but 伝 son み の group in え ウ イ ル ス を make し て, そ の pathogenicity を マ ウ ス モ デ ル を with い て parsing し た. Group み in え ウ イ ル ス は み in same group え に よ り, HH1 の 71 times but 伝 strains within に beta ガ ラ ク ト シ ダ ー ゼ (beta gal) heritage 伝 son を scions into し た も の と beta (beta - 71), 71 strains の 71's beta gal, combined with heritage 伝 son を BK343 の 71 strains were heritage 伝 son あ る い は HH1 の 71 strains were 伝 son に buy き change Youdaoplaceholder0 えた た (それぞれ, 3F-71 strain,Res-71 strain)を made た. こ れ ら の ウ イ ル ス の を culture cell biological traits を with い て beg し 検 た と こ ろ, ウ イ ル ス copy に big き な poor は み ら れ な い も の の, beta - 71 strains の extracellular へ の ウ イ ル の ス release quantity decrease tendency が み ら れ た. ま た, group み in え ウ イ ル ス の プ ラ ッ ク can form は, strain ウ マ skin (e. Derm) cells を using い る と す べ て HH1 と strains with others で あ っ た が, BK343 で は プ ラ ッ ク サ イ ズ は small さ か っ た. こ れ ら の ウ イ ル ス を マ ウ ス に 経 nasal vaccination し, マ ウ ス lung で の ウ イ ル ス infection 価 を determination し た と こ ろ, beta - 71 strains と BK343 strains の infection 価 は HH1 strains の about 1/100 で あ っ た が, 3 f - 71 strains と Res - 71 strains の infection 価 は HH1 strains と ほ ぼ etc し か っ た. The above classification results are よ よ, the pathogenic nature of the 伝 by-products of the 71 series is に related to する された とが suggesting された. し か し, HH1 strains の 71 times but 伝 を BK343 の 71 strains were heritage 伝 son に buy き in え た 3 f - 71 strains で は rights can yield low の が recognize め ら れ な か っ た こ と か ら, BK343 の low pathogenicity に は 71's legacy 伝 son の - different outside の by も masato and し て い る こ と が in stopping さ れ た. Now, 1 but 伝 と 24 times heritage 伝 son に つ い て with others の beg を 検 into め て い る.

项目成果

R. Kirisawa: "Growth and protective potentials of attenuated strains of equid herpesvirus 1 in the lungs of mice" J. Vet. Med. B. 42. 391-396 (1995)

R. Kirisawa：“马疱疹病毒 1 型减毒株在小鼠肺部的生长和保护潜力” J. Vet。