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ウマヘルペスウイルス1型レセプターのクローニング

马疱疹病毒1型受体的克隆

基本信息

批准号：
04J09151
负责人：
長谷部理絵
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

ウマヘルペスウイルス1型(EHV-1)はアルファヘルペスウイルス亜科に属し、馬に鼻肺炎、流産、脳脊髄炎を惹き起こす。ヒト単純ヘルペスウイルス(HSV)など他のアルファヘルペスウイルスではウイルス侵入に関わるウイルス側および細胞側因子が明らかとなってきている。一方、EHV-1ではエンベロープ蛋白であるgDが細胞への侵入に必要であることが報告されているものの、細胞側因子に関しては不明である。本研究ではEHV-1の細胞内侵入に関与する細胞側因子の解明、特にウイルスレセプターの同定を目的とする。EHV-1脳脊髄炎においてウイルス感染の標的となる馬脳微小血管内皮細胞(EBMECs)の初代培養系を確立し、EHV-1のEBMECs細胞内侵入様式を検索したところ、カベオラ介在性エンドサイトーシスの関与が示唆された。カベオラ介在性エンドサイトーシスはレセプター誘導性であることから、EBMECsにはEHV-1レセプター分子が発現していることが推測された。現在報告されているアルファヘルペスウイルスレセプターのうち、Nectin-1は動物種間でよく保存され、アミノ酸レベルで90%以上の相同性を示す。実際にヒト、マウスのNectin-1はHSV、仮性狂犬病ウイルス、ウシヘルペスウイルス1型の細胞への侵入を促進する。そこで、EBMECs cDNAからウマNectin-1ホモログをPCRクローニングし、EHV-1レセプターとしての機能を評価した。EHV-1侵入を許容しないNIH3T3細胞にウマNectin-1を発現させ、EHV-1を感染させたところ、細胞へのウイルス侵入は促進されなかった。従って、EHV-1は他のアルファヘルペスウイルスとは異なる分子をレセプターとして利用している可能性が考えられた。今後はEBMECsのcDNAライブラリーを用いた発現クローニングによりEHV-1レセプターの同定を試みる。

EHV-1 is the first type of infection in the world. It is a simple, and One side, EHV-1, EHV-1, EHV The aim of this study was to elucidate the relationship between EHV-1 and cellular invasion, and to determine the identity of EHV-1. The establishment of primary culture lines of EHV-1 microvascular endothelial cells (EBMECs) as targets of EHV-1 chiropractic infection, and the identification of intracellular invasion patterns of EHV-1 EBMECs. It is speculated that We now report that Nectin-1 has more than 90% identity among animal species. In fact, Nectin-1 promotes the invasion of HSV and rabies virus type 1 cells. EHV-1 gene expression was evaluated by PCR and EHV-1 gene expression. EHV-1 invasion is allowed in NIH 3T3 cells, and Nectin-1 expression, EHV-1 infection, and cell invasion are promoted. EHV-1 is a new type of molecule. Now, the cDNA of EBMECs can be used to detect the EHV-1 gene.