組換えウイルスを用いたウマヘルペスウイルス1型の病原性遺伝子の解析

利用重组病毒分析马疱疹病毒1型致病基因

• 批准号: 08660370
• 负责人: 桐澤 力雄
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Rakuno Gakuen University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08660370/
• 关键词: 組換えウイルス; ウマヘルペスウイルス1型; DNA; 1番遺伝子

ウマヘルペスウイルス1型(EHV-1)の毒HH1株をウシ腎臓(BK)細胞で長期間連続的に継代して弱毒化したBK343株では1番遺伝子(機能不明),24番遺伝子(テグメントタンパク)および71番遺伝子(膜糖タンパク)に変異のあることをこれまでの研究で明らかにした。さらに、これらの遺伝子のうち71番遺伝子の変異と病原性の関係を組換えウイルスを作出して解析したところ、71番遺伝子を不活化すると病原性の低下を示すことを見い出した。本研究では1番遺伝子の変異と病原性との関連を調べるために3種類の1番遺伝子の組換えウイルスを作出して、その病原性をマウスモデルを用いて解析した。組換えウイルスは相同組換えにより、HH1株の1番遺伝子内にβ-ガラクトシダーゼ(β-gal)遺伝子を挿入したもの(β-1株)とβ-1株の1番・β-gal結合遺伝子をBK343株の1番遺伝子あるいはHH1株の1番遺伝子に置き換えたもの(それぞれ、3F-1株、Res-1株)を作出した。これらのウイルスの構成タンパクをSDS-ポリアクリルアミド電気泳動とHH1株に対するウサギ高度免疫血清を用いてウェスタンブロットで解析したところ、親株HH1との間に大きな差異は認められなかった。培養細胞におけるウイルス増殖性を検討したところ、組換えウイルスとHH1株に大きな差異はみられなかった。これらのウイルスをマウスに経鼻接種し、マウス肺でのウイルス感染価を測定したところ、β-1株、3F-1株とRes-1株の感染価は強毒のHH1株とほぼ等しかった。BK343株の感染価はHH1株の約1/100であった。以上の成績より、1番遺伝子産物はEHV-1の主要なウイルス構成タンパクではないこと、そして培養細胞ならびにマウス肺における増殖性に直接関与しないことが示唆された。現在、24番遺伝子について同様の検討を進めている。

The study on the long-term association of BK cells with EHV-1 virus HH1 strain showed that BK343 strain had 1 gene (function unknown), 24 genes (function unknown) and 71 genes (membrane sugar). The relationship between pathogenicity and genetic diversity of the 71 genes was analyzed and the pathogenicity was reduced. In this study, we analyzed the relationship between the pathogenicity and the diversity of 1 strain. In the same group, HH1 strain contains β-glucuronidase (β-gal), BK 343 strain contains β-glucuronidase (β-1 strain), BK 343 strain contains β-gal, BK 3F-1 strain contains β-gal, BK343 strain contains β-gal, BK 3F-1 strain contains β-gal, BK343 strain contains β- The composition of H1 strain is different from that of SDS1 strain. Culture of cells, cell proliferation, cell culture, cell culture The virus was detected by inoculation with the virus, β-1 strain, Res-1 strain and HH strain. BK343 strains infected with HH1 strain about 1/100. The above results show that EHV-1 gene products are directly related to the proliferation of cultured cells. Now, the 24-part heritage is in the middle of the same kind of discussion.

项目成果

Rikio Kirisawa: "Nucleotide sequences of open reading frames 1,24 and 71 of an attenuated equine herpesvirus-1." J.Equine Sci.7(4)(in press). (1996)

Rikio Kirisawa：“减毒马疱疹病毒 1 号开放阅读框 1,24 和 71 的核苷酸序列。”