豚の腸管免疫に関する研究-粘膜関連リンパ組織由来リンパ球の性状-

猪肠道免疫研究-粘膜相关淋巴组织来源淋巴细胞的特性-

• 批准号: 07660421
• 负责人: 井上 武
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07660421/
• 关键词: 腸上皮間リンパ球; 粘膜固有層リンパ球; CD4; CD8; SIg; 豚

1.豚腸上皮間リンパ球(iIEL)の分離はマウスでの方法に準じて行った。すなわち,回腸口から回腸側に約1mから2mの部分を採取し,洗浄した後パイエル板を除去し,細切してiIEL分離液(5%Glucose,5mM EDTA加PBS)を加え,37℃で15分間振盪し,ついで洗浄・細胞の回収を繰り返し,PBSに再浮遊させ,グラスウ-ルカラムにかけて未吸着細胞を回収した。その結果,10ml容積の腸断片から約5x10^7個の生細胞が得られた。次に,腸断片から粘膜固有層リンパ球(LPL)を分離するためD,分離液(0.015%コラゲナーゼ2%FCS加PBS)中で,37℃,75分間振盪し,200メッシュ上で濾過した後,腸断片をすりつぶし,PBSで洗浄回収した。濾過した細胞浮遊液はグラスウ-ルカラムにかけ,比重遠心法によりリンパ球を回収した。その結果,10ml湿潤容積の腸断片から約2x10_7個の細胞が得られた。2.iIELおよびLPLについてCD4,CD8,Surface Ig(SIg)の陽性細胞率を脾臓リンパ球と比較した。豚脾臓リンパ球ではCD4,CD8,SIgの陽性率はそれぞれ,13.7%,19.5%,31.2%であった。一方,iIEL,LPLともにSIg陽性細胞はほとんど観察されなかった。CD4の特異蛍光は弱く,陽性細胞率はiIELで10.3%,LPLで14.7%であった。CD8の特異蛍光はCD4と比較して強く、その陽性細胞率はiTELで52.3%,LPLでは26.6%であり,iIELで極めて高い陽性率を示した。以上のように,豚iIELおよびLPLは分解可能であり,また材料も豊富に採取できることから,比較医学上からもその利用が有用と考えられた。また,サプレッサー/細胞障害性T細胞とされるCD8陽性細胞率がiIELで極めて高いことは,経口免疫寛容などの点から極めて興味深い所見である。

1. The method of isolation of porcine intestinal epithelial epithelial balls (iIEL) is accurate and accurate. Take the part of about 1m and 2m from the side of the ileum at the entrance of the ileum, remove it after washing, and cut it finely. iIEL separation solution (5% Glucose, 5mM) EDTA plus PBS), shake at 37°C for 15 minutes, wash with water and collect cells Return to the environment, re-float in PBS, recover cells without adsorbed cells, and recover the cells using グラスウ-ルカラムにかけて. As a result, approximately 5x10^7 raw cells can be obtained from 10ml volume of intestinal fragments. Intestinal fragments, mucosal lamina propria リンパ ball (LPL) separation, D, isolation solution (0.015% コラゲナーゼ2% FCS plus P BS), 37℃, shake for 75 minutes, filter on 200 メッシュ, cut the intestine into pieces, wash and recover with PBS. Filter the cell suspension liquid and collect it using the specific gravity telecentric method. As a result, approximately 2x10_7 cells can be obtained from 10ml of intestinal fragments with a moist volume. 2. iIEL's LPL's CD4, CD8, Surface Ig (SIg) positive cell rate and the comparison of the spleen and stomach cells. The positive rates of CD4, CD8, and SIg in pig spleen cells are 13.7%, 19.5%, and 31.2%. On the one hand, iIEL, LPL and SIg-positive cells were detected. The specificity of CD4 is weak, the positive cell rate is 10.3%, and the LPL is 14.7%. CD8's specific light and CD4 are relatively strong, iTEL's positive cell rate is 52.3%, LPL's 26.6% is high, and iIEL's extremely high positive rate is shown. The above のように, dolphin iIEL およびLPL は decomposition is possible であり, また material も芊Rich に adopts できることから, which is more useful in medicine than からもそのutilization and とtest えられた. IELで极めて高いことは,経口immuno寛四などの点から extremely めてinteresting and deep い见である.