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染色体テロメアを用いた造血器悪性腫瘍の分子生物学的予後診断

利用染色体端粒进行造血系统恶性肿瘤的分子生物学预后

基本信息

批准号：
07671224
负责人：
小峰光博
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07671224/
关键词：
テロメレース白血病

项目摘要

腫瘍細胞に特異的に存在すると考えられるテロメレースは、新しい抗腫瘍剤の作用点としてきわめて有望な候補の一つと期待される。ヒト・テロメレースはその活性が非常に低いために、高感度かつ特異性の高い検出方法の開発が望まれていたが、我々はテロメレース産物をPCR法によって遺伝子増幅し解析することが非常に有用であることを見いだした。そのようにして得られた"Stretch PCR法"は、現在、汎用されている"TRAP assay"と比較すると、感度、特異性のみならず、定量性において大変優れた方法であることが明らかになった(Tatematsu et al., submitted)。すなわち、PCRを用いる場合、反応の基質となるテロメレース産物の量(これは活性と比例すると考えられる)と最終的なPCR生成産物の量とは必ずしも相関しない場合が多いが、我々は反応条件、プライマーの配列を十分に検討することにより、非常に広い範囲のテロメレース活性について良好なdose-response曲線を得ることに成功した。このような検出系の特徴は、たとえば、阻害剤を開発するためにはきわめて重要な要件であると考えられる。次に、我々は慢性骨髄性白血病(CML)、急性骨髄性白血病(AML)および健常者由来の血液細胞について"Stretch PCR法"により、それぞれテロメレース活性を定量化することに成功した(Tatematsu et al., submitted)。その結果、正常末梢血有核細胞にはポジティブ・コントロールとした白血病細胞株U937の1/10^4以下の微量のテロメレース活性しか存在しないことが分かった。CML慢性期においては、正常血液細胞と同程度の活性しか存在しなかったが、急性転化症例ではU937細胞の数十%の強いテロメレース活性が検出された。一方、AMLのうち初発例では、一般に弱い活性しか検出されなかったのに対し、再発例では強い活性が検出された。以上の事実は、テロメレースが正常細胞ではほとんど発現しておらず、腫瘍細胞においてもCMLの急性転化例やAML再発例など、従来の抗がん剤が無効であることの多いいわゆる難治性がんでおきていることを示している。

The presence of tumor cell-specific agents is expected to be a candidate for anti-tumor agents. The activity of PCR is very low, the sensitivity is high, the specificity is high, and the detection method is very useful. "Stretch PCR" is now widely used in comparison with "TRAP assay" in sensitivity, specificity and quantification (Tatematsu et al., submitted)。In the case of PCR application, the amount of PCR product produced by the substrate (activity ratio) and the final amount of PCR product produced by the substrate (activity ratio) must be related to each other. In the case of PCR application, the amount of PCR product produced by the substrate (activity ratio) and the final amount of PCR product produced by the substrate (activity ratio) must be related to each other. In the case of PCR application, the amount of PCR product produced by the substrate (activity ratio) and the final amount of PCR product produced by the substrate (activity ratio) must be related to each other. In the case of PCR application, the amount of PCR product produced by the substrate (activity ratio) must be related to each other. In the case of PCR application, the amount of PCR product produced by the substrate (activity ratio) and the final amount of PCR product produced by the substrate (activity ratio) must be related to each other. In the case of PCR application, the amount of PCR product produced by the substrate (activity ratio) and the final amount of PCR product produced by the substrate (activity ratio) must be related to each other. The characteristics of this system are: In addition, we successfully quantified the activity of CML, AML, and healthy blood cells by Stretch PCR (Tatematsu et al., submitted)。As a result, normal peripheral blood nucleated cells showed trace activity below 1/10^4 of leukemia cell line U937. In the chronic phase of CML, the activity of normal blood cells was found to be similar to that of U937 cells, and in the acute phase of CML, the activity of U937 cells was found to be strong. For one thing, AML has a weak initial activity and a strong secondary activity. The above facts are true and correct. In normal cells, acute cases of CML and AML reappear. In tumor cells, acute cases of CML and AML reappear. In many cases, the disease is refractory.