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細胞による三次元(空間)情報の認識機構の研究-コラーゲン遺伝子の三次元情報認識配列の解析

细胞对三维（空间）信息识别机制的研究——胶原蛋白基因三维信息识别序列分析

基本信息

批准号：
07680764
负责人：
畑隆一郎
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト皮膚線維芽細胞を2次元のコラーゲンマトリックス上で培養すると、細胞自身のコラーゲン合成活性は、細胞をポリスチレン培養皿に直接播種した場合より若干高い値を示した。一方、細胞を3次元のコラーゲンマトリックス内で培養すると、ゲル濃度(0.08-0.3%)に拘わらず、細胞の増殖とコラーゲン合成活性は阻害された。細胞の形態は2次元のコラーゲン上では細胞はマトリックスに密に接着し、扁平な形態を示した。一方、3次元のコラーゲンゲル内では、細胞は細長い突起を持つ形態を示した。[^3H]-プロリン標識蛋白質をSDS/5%ポリアクリルアミドゲル電気永動後フルオログラフィーを行った。その結果、3次元のゲル内におけるα1(I)鎖、α2(I)鎖の減少が顕著であった。さらに、ノーザンブロット法による測定でも、ゲル内培養により、α1(I)鎖とα2(I)鎖mRNAレベルの低下が顕著であった。α1(I)鎖遺伝子のプロモーター(転写開始部位を+1としてその上流-500bpから第一エキソンの翻訳開始部位の前まで)を含むコンストラクト、第一イントロンを含むコンストラクト、及び遺伝子の上流-2200bpを含むコンストラクトを作成し、正常線維芽細胞にトランスフェクト後、プラスチック培養皿、2次元のコラーゲン上、或いは3次元のコラーゲンゲル内で培養し、ルシフェラーゼ活性の測定を行った。その結果、2次元のコラーゲン上では、染色体内の遺伝子と同様に、プロモーターの下流にセンスの方向に第一イントロンを含むコンストラクトが最大の発現活性を示した。一方、3次元のゲル内では、プロモーターの上流に第一イントロンをアンチセンスの方向に結合したコンストラクトの発現の阻害が最大であった。細胞は細胞自身の位置情報を認識し、コラーゲン遺伝子の発現を転写レベルで制御しており、第一イントロンにその認識(応答)配列が局在する事が明らかになった。

The cells of the skin line are cultured in a two-dimensional culture medium, and the cells themselves are cultured in a culture medium. The concentration (0.08-0.3%) of vitamin C in culture medium inhibited the growth and synthesis of vitamin C. Cell morphology is two-dimensional, dense and flat. A square, three-dimensional space inside the cell, thin and long, protruding from the cell. [^3H]-Protein identification SDS/5% protein identification The result is that the α1(I) lock and α2(I) lock in the 3-dimensional space are reduced. In addition, the expression of α1(I) and α2 (I) mRNA in the culture medium was determined by the method of "α1(I)-lock vector (Write start position +1 to +500bp upstream to +1 to +1 3-D measurement of the activity of the enzyme The results show that the highest activity of the first gene in the direction of the second gene, the highest activity of the first gene in the direction of the second gene, the highest activity of the first gene in the direction of the second gene, the highest activity of the second gene in the direction of the third gene, the highest activity of the third gene in the direction of the fourth gene. The resistance to the occurrence of the first and third dimensional elements is the greatest. The cell recognizes the location information of the cell itself, and the occurrence of the cell gene is controlled by the cell itself. The recognition of the first cell gene is arranged in the cell itself.