ヒトI型コラ-ゲン遺伝子の転写調節機構の研究:cisーacting elementsの解析

人I型胶原蛋白基因转录调控机制研究：顺式作用元件分析

• 批准号: 03833011
• 负责人: 畑 隆一郎
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03833011/
• 关键词: コラ-ゲン; 転写調節; cisーacting elements; エ-ラ-ダンロス症; 活性持続型ビタミンC

我々は活性持続型ビタミンC(Asc2ーP)がヒトI型コラ-ゲンを構成するα_1(I)鎖およびα_2(I)鎖遺伝子の転写を活性性化することを明らかにした。本年度はこの転写活性化機構の解析を行った。1.Asc2ーPによる転写活性化過程を明らかにするために,ヒト皮膚線維芽細胞をAsc2ーPで8時間から6日間処理し,α_1(I),α_2(I)鎖の合成量,mRNA量,核転写活性を調べた。Asc2ーP処理6日後にα_1(I),α_2(I)鎖の合成は6倍に上昇した。一方、それぞれに対するmRNA量は処理3日後に最大となり,未処理の3倍の値を示した。核の転写活性は処理8時間後に2倍,40時間後に3倍となり,以後一定となった。また,Asc2ーPと同時にシクロヘキシイミドを添加し,細胞の蛋白質合成を90%以上阻害してもAsc2ーPによるI型コラ-ゲン遺伝子の転写活性化は阻害されなかった。これらの結果はAsc2ーPは蛋白質の合成を介さずにI型コラ-ゲンを構成するα_1(I)鎖およびα_2(I)鎖遺伝子の転写を同時に活性化することが明らかになった。また,mRNAの翻訳の活性化機構の存在も示唆された。2.エ-ラ-ダンロス症(EDS)患者細胞におけるα_2(I)鎖遺伝子の転写の阻害。我々は先にEDS患者細胞でα_2(I)鎖が検出されないことを報告した。この細胞をAsc2ーPで処理すると,α_1(I)鎖遺伝子の転写は正常細胞と同様に活性化されたが,α_2(I)鎖遺伝子ではAsc2ーPによる活性化は全く起らなかった。このことから,EDS患者細胞のα_2(I)鎖遺伝子ではAsc2ーPに応答するcisーacting elementsに異常があると考えられる。現在この患者細胞のα_2(I)鎖遺伝子のプロモ-タ-領域とエンハンサ-領域と考えられる第1イントロンの部分をPCR法で増幅し,クロ-ニング中である。この部分の塩基配列の決定により,Asc2ーPに応答する配列が明らかになると考えられる。

Type I 々 は activity hold 続 ビ タ ミ ン C (Asc2 ー P) が ヒ ト type I コ ラ - ゲ ン を constitute す る alpha _1 (I) lock お よ び alpha _2 (I) lock heritage 伝 son の planning write を active sex change す る こ と を Ming ら か に し た. For the current year, write the line を for the analysis of the activated institution を in 転 転 転. 1. Asc2 ー P に よ る planning process writing activity を Ming ら か に す る た め に, ヒ ト skin line d bud cells を Asc2 ー P で 8 time か ら 6 daytime 処 し, alpha _1 (I), alpha _2 (I) lock の synthetic quantity, amount of mRNA, nuclear planning write activity を adjustment べ た. After 6 days of Asc2 <s:1> P treatment, にα_1(I),α_2(I) lock <s:1> synthesis に 6 times に increase た た. One party, それぞれに, after processing the amount of するmRNA for それぞれに 3 days, に is the maximum とな それぞれに, and the unprocessed <s:1> 3 times <s:1> value を shows た た. The nuclear code 転 writes the activity 転 processing. After 8 hours, に doubles; after 40 hours, に tritimes; とな に; and in the future, it will definitely となった. ま た, Asc2 ー P と simultaneously に シ ク ロ ヘ キ シ イ ミ ド を add し, cell の を protein synthesis by more than 90% resistance against し て も Asc2 ー P に よ る type I コ ラ - ゲ ン posthumous son 伝 の planning write activeness は resistance against さ れ な か っ た. こ れ ら の results は Asc2 ー P の は protein synthesis を interface さ ず に type I コ ラ - ゲ ン を constitute す る alpha _1 (I) lock お よ び alpha _2 (I) lock heritage 伝 son の planning write を and に activeness す る こ と が Ming ら か に な っ た. Youdaoplaceholder0, there is an indication of された for the activation mechanism <e:1> of 訳 訳 by mRNA <s:1>. 2. In patients with エ-ラ-ダ <s:1> ロス disease (EDS), the におけるα_2(I) cells lock the 伝 subzygote 転 write <s:1> obstruction. I 々 々 first にEDS patient cells でα_2(I) lock が検 out されな とを とを とを とを とを report た. こ の cells を Asc2 ー P で 処 Richard す る と, alpha _1 (I) lock heritage 伝 son の planning write は と normal cells with others に activeness さ れ た が, alpha _2 (I) lock heritage 伝 son で は Asc2 ー P に よ る activeness は く up all ら な か っ た. こ の こ と か ら, patients with EDS cells の alpha _2 (I) lock heritage 伝 son で は Asc2 ー P に 応 answer す る cis ー acting elements に abnormal が あ る と exam え ら れ る. Now こ の cells in patients with の alpha _2 (I) lock heritage 伝 son の プ ロ モ タ - field と エ ン ハ ン と サ - field test え ら れ る 1 イ ン ト ロ ン の part で を PCR method raised し, ク ロ - ニ ン グ in で あ る. The <s:1> <s:1> part of the <s:1> base configuration <s:1> determines によ によ,Asc2 <s:1> Pに応 answers する configuration が, ら になると になると examines えられる.

项目成果

畑 隆一郎,妹尾 春樹: "組織形成を誘導するビタミンC" 日経サイエンス(記念論文優秀作). 22#2. 88-97 (1992)

Ryuichiro Hata、Haruki Seno：“诱导组织形成的维生素 C”（优秀纪念论文）222（1992 年）。

畑 隆一郎,妹尾 春樹: "コラ-ゲン" 肝胆膵. 23. 73-79 (1991)

Ryuichiro Hata，Haruki Seno：“胶原蛋白”肝胆胰 23. 73-79 (1991)

Shunーichi Kurata Ryuーichiro Hata: "Epdermal Growth Factor Inhibits Transcription of Type I Collagen Genes and Production of Type I Collagen in Cultured Human Skin Fibroblests in the Presence and Absence of LーAscorbic Acid 2ーPhosphate,a Longーacting Vitamin

Shunichi Kurata Ryuichiro Hata：“在存在或不存在 L-抗坏血酸 2-磷酸酯（一种长效维生素）的情况下，表皮生长因子抑制 I 型胶原蛋白基因的转录和培养的人类皮肤成纤维细胞中 I 型胶原蛋白的产生

畑 隆一郎: "細胞外マトリックス系による細胞増殖制御" 蛋白質核酸酵素. 36. 1069-1077 (1991)

Ryuichiro Hata：“细胞外基质系统控制细胞生长”蛋白质核酸酶。36。1069-1077（1991）