アフリカツメガエル卵の系を用いた核膜形成機構に関する研究

利用非洲爪蟾卵系统研究核膜形成机制

• 批准号: 07808080
• 负责人: 堀米 恒好
• 金额: --
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07808080/
• 关键词: 核膜小胞; 核膜; 核膜形成; 細胞周期; アフリカツメガエル; 核形成; オルガネラ形成; 核マトリックス

アフリカツメガエルの卵の抽出液の系を用いて、核膜再構成の最初のステップである核膜小胞とクロマチンの結合の性状を調べ、この結合に関与する小胞上の膜タンパク質候補を検索し、次のよな結果を得た。1.核膜前駆小胞上のクロマチン結合因子は、膜内在性タンパク質もしくは膜と強固に結合したタンパク質であり、クロマチン上の因子も非常に強く結合したタンパク質であることが示唆された。2.小胞上に存在するクロマチン結合タンパク質の活性にはリシン、ヒスチジン、メチオニン残基が重要であることが化学修飾法で示された。3.小胞とクロマチンの結合は、イオン強度0.34以上で阻害されたことから、その結合に働いている相互作用は静電的なものであると考えられた。4.非イオン性界面活性剤で可溶化した膜蛋白質をクロマチンと反応させ、クロマチンと核膜前駆小胞との結合が阻害されるイオン強度に一致して、クロマチンから解離してくる5つの膜蛋白質(100k,92k,62k,50k,45k)を見いだした。さらに、様々な試薬処理を施した膜画分から、それぞれの試薬による小胞とクロマチンとの結合阻害の結果に対応して、クロマチンに結合しなくなる5つの膜蛋白質(100k,74k,73k,62k,45k)を見出した。これらのうち100k,62k,45kの挙動は、小胞とクロマチンとの静電的な結合の性質、および様々な試薬による結合阻害の結果と一致していたことから、核膜前駆小胞上でクロマチン結合蛋白質として機能していることが示唆された。今後これらの三つのタンパク質を精製し、cDNAクローニングや構造解析へと研究を進めていきたい。

The first phase of nuclear membrane reconstruction is regulated by the binding properties of nuclear membrane vesicles, and the second phase of nuclear membrane vesicles is obtained by the candidate of membrane vesicles. 1. The binding factor on the nuclear membrane front cell is very strong, and the membrane intrinsic property is very strong. 2. The presence of these residues in small cells and the activity of these molecules are demonstrated by chemical modification. 3. Small cells combine with each other, and the strength is above 0.34. The resistance is above 0.34. The interaction between the two is static. 4. Non-ionic interfacial active agents solubilize membrane proteins, inhibit binding of nuclear pre-membrane vesicles, and inhibit binding of membrane proteins (100k,92k,62k,50k,45k). The membrane proteins (100k,74 k, 73k,62k,45k) were found in the binding inhibition results of the membrane proteins (100k,74k,73k,62k,45k). 100k,62k,45k of the kinetic energy, small cell, electrostatic binding properties, test results of binding resistance are consistent, nuclear membrane front small cell, small cell, electrostatic binding protein function, test results are consistent. In the future, the quality of the three components will be refined, and the structure analysis of cDNA will be further developed.

项目成果

N.Imai: "Purification of 39 KDa and 50 KDa putatire nucleoporins from rattiver nuclear envelopes." Biochemistry(Life Sci.Adv.). 14. 59-66 (1995)

N.Imai：“从大鼠核膜中纯化 39 KDa 和 50 KDa putatire 核孔蛋白。”

S.Kawahire: "Subcellular distribution and phosphorylation of the nuclear localization signal binding protein,NBP60." Exp.Cell Res.222(印刷中). (1996)

S.Kawahire：“核定位信号结合蛋白 NBP60 的亚细胞分布和磷酸化。”Exp.Cell Res.222（出版中）。