新しい核膜孔複合体蛋白質p50とp39の構造と蛋白質核移行における役割

新核孔复合蛋白p50和p39的结构及其在蛋白质核输入中的作用

• 批准号: 09263205
• 负责人: 堀米 恒好
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09263205/
• 关键词: 蛋白質核移行; 核外輸送; mRNA輸送; mRNA結合蛋白質; 核膜孔複合体; DNAヘリカーゼ; RuvBヘリカーゼ; 核マトリックス

核膜孔複合体の蛋白質のp50、p39を中心に、隔膜の構造と機能を調べ次のような結果を得た。まず核膜蛋白質分離のための60%ギ酸中での逆相HPLCを開発し、構造解析のための蛋白質が容易に得られるようになった。そしてp50、p39その他の蛋白質をこの方法で精製した。クローン化したp50のアミノ酸配列を調べたところ大腸菌のDNAヘリカーゼRuvBとホモロジーが認められた。p50は細胞分画法で核膜-核マトリックス画分に局在していることが示された。またp50はATP-セファロース結合活性をもっていた。抗p50を培養細胞に微量注入したが蛋白質の核移行は阻害されなかった。p50結合蛋白質を免疫沈殿法で調べたところ、WGA結合性の64kと非結合性の47kの蛋白質が結合していることがわかった。これらの結果より、p50は真核生物では初めての、RuvBホモログのDNAヘリカーゼであり、核膜または核マトリックスに、64k、47kの蛋白質と複合体の形で結合して機能しているものと考えられた。ラットp39は部分アミノ酸配列を調べてデータベース検索をしたところ、核外輸送蛋白質のRae1のラットホモログであることが明らかとなったことから、mRNAの核外輸送に働いている蛋白質と考えられた。また一方この蛋白質は原発性胆汁性肝硬変およびシェ-グレン症候群の自己免疫性疾患患者血清と反応したことから、これら患者の自己抗原の一つであることが明らかとなった。その他、核膜内膜にある核移行シグナル結合蛋白質(NBP60/LBR)とクロマチンの相互作用を解析しこの蛋白質の機能ドメイン構造を明らかにすると共に、この蛋白質を含んでいると考えられる核膜前駆小胞とクロマチンの相互作用を解析した。

p50 and p39 of the protein of nuclear pore complex are regulated by the structure and function of membrane. The separation of nuclear membrane proteins and their structural analysis by reverse-phase HPLC were easy to obtain. P50, p39 and other proteins are purified. The DNA of Escherichia coli was detected by DNA sequencing. p50 cell analysis method nuclear membrane-nucleus analysis method p50-p50-p50 p50-resistant cells were microinjected with protein to inhibit nuclear migration. p50-binding protein is regulated by immuno-sedimentation, WGA binding protein is 64k and non-binding protein is 47k. As a result of this, the p50 protein complex in eukaryotic organisms is bound to DNA, nuclear membrane, 64k and 47k protein complexes. The p39 gene is a part of the DNA sequence that regulates the expression of proteins in the extracellular domain. The serum of patients with primary biliary cirrhosis and autoimmune diseases is characterized by a high level of protein and a high level of antigenicity. In addition, we will analyze the interaction between the nuclear migration sigler-binding protein (NBP60/LBR) and the macrophage in the inner membrane of the nuclear membrane. We will also analyze the interaction between the nuclear membrane anterior vesicle and the macrophage by clarifying the functional structure of this protein.

项目成果

柴田実: "最近注目されている抗核膜抗体 -原発性胆汁性肝硬変を中心として-" 日本医事新報. 3812号. 16-21 (1997)

Minoru Shibata：“最近引起关注的抗核膜抗体 - 关注原发性胆汁性肝硬化 -”日本医疗新报第 3812. 16-21 号（1997 年）。

Noriko Kikuchi: "Reversed-phase high-performance liquid chromatography of membrane proteins on perfusion-type polystyrene resin columns in 60% formic acid" Chromatography. 18・3. 176-184 (1997)

Noriko Kikuchi：“在 60% 甲酸中的灌注型聚苯乙烯树脂柱上进行膜蛋白的反相高效液相色谱”18・3（1997 年）。

Shigeru kawahire: "cDNA cloning of nuclear localization signal binding protein NBP60, a rat homologue of lamin B receptor, and indentification of binding sites of human lamin B receptor for nuclear localization signals and chromatin" J. Biochem.121・5. 881

Shigeru Kawahire：“核定位信号结合蛋白 NBP60（核纤层蛋白 B 受体的大鼠同源物）的 cDNA 克隆，以及核定位信号和染色质的人核纤层蛋白 B 受体结合位点的鉴定”J. Biochem.121・5。

Norio Imai: "Characterization of the binding of nuclear envelope precursor vesicles and chromatin, and purification of the vesicles" J. Biochem.122・5. 1024-1033 (1997)

Norio Imai：“核前体囊泡和染色质结合的表征以及囊泡的纯化”J. Biochem.122・5 1024-1033（1997）。