核蛋白質の局在化に関与する核膜蛋白質群の蛋白質化学的・免疫化学的研究

参与核蛋白定位的核膜蛋白的蛋白质化学和免疫化学研究

• 批准号: 05252211
• 负责人: 堀米 恒好
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05252211/
• 关键词: 核膜孔タンパク質; 核膜タンパク質; 核移行; 核移行シグナル; 核移行シグナル結合タンパク質; 蛋白質の輸送機構; タンパク質の核への輸送; 膜透過機構

タンパク質の核移行に関与していると考えられる核膜タンパク質のうち、本年度は主にラット肝のヌクレオポリンと、核移行シグナル結合タンパク質NBP60についてさらに研究を進め、次のような結果を得た。まず、代表的なヌクレオポリンであるp62を、私たちが確立した精製法で精製し、その生化学的性質について調べたところ、このタンパク質は、54k,60kのヌクレオポリンと1:1:2の比で強固に結合し、複合体を形成していることが明らかとなった。またこの複合体の軸比は20と大きく、棒状の形をしていることが示された。これらの結果をJ.Biochem.に発表した。また、この複合体に対する抗体をウサギで調製し、これを培養細胞にマイクロインジェクションしたところタンパク質の核移行が阻害されたことから、この複合体がタンパク質の核移行に関与していることが確認された。現在さらに、ヌクレオポリンに結合している核膜孔タンパク質の精製を進めている。核移行シグナル結合タンパク質NBP60の精製法を論文にまとめて公表した。この方法で、NBP60を大量調製し、ウサギに注射して抗体を調製した。この抗体を用いてNBP60の細胞内局在を、細胞分画法と組織化学的方法で調べたところ、そのほとんどが核膜に局在していることが示された。この抗血清のグロブリン画分を培養細胞にマイクロインジェクションしたところタンパク質の核移行が抑制されたことから、NBP60は、タンパク質の核移行に関与していることが示唆された。今後は、NBP60の構造解析を進めていきたい。

タンパク性ののうち、は主にラットganganのヌクレオポリンと, nuclear migration シグナル combined with タンパク mass NBP60 についてさらに research を advance め, times のような results を got た.まず, representative なヌクレオポリンであるp62を, private たちがestablishedしRefining method, refining, and biochemical properties.タンパク性は、54k,60kのヌクレオポリンと1:1:2のThe ratio is stronger, the combination is stronger, and the complex is formed. The axial ratio of the またこのcomplex is は20と大きく, and the rod-shaped をしていることがshows された.これらのRESULTSをJ.Biochem.に発表した.また、この Complex に対するAntibody をウサギで Modulation し、これをCulture Cell Culture Systemされたことから of ンパク性のnuclear migration, このcomplex がタンパク性のnuclear migration に关 and していることがconfirmed された. Now it is a combination of さらに, ヌクレオポリンに and しているnuclear membrane hole タンパクquality のrefined めている. Nuclear migration シグナル combined with タンパク quality NBP60's purification method を paper にまとめてpublic table した. The method is the same, NBP60 is prepared in large quantities, and the antibody is injected and prepared. The intracellular localization, cell dissection and histochemistry methods of このantibodies using いてNBP60 The French tune is the same as the original one, the nuclear membrane is the same as the nuclear membrane.このantiserum, のグロブリンdrawing, cultured cells, にマイクロインジェクションしたところタンパク, のnuclear transfer It inhibits the movement of nuclei, NBP60, NBP60, and nuclear migration. From now on, structural analysis of NBP60 will be further progressed.

项目成果

Makoto Haino: "Purification of a 60 kDa nuclear localization signal binding protein in rat liver nuclear envelopes and characterization of its properties" J.Biochem.113. 308-313 (1993)

Makoto Haino：“大鼠肝核膜中 60 kDa 核定位信号结合蛋白的纯化及其特性的表征”J.Biochem.113。

Konami Kita: "Purification and characterization of a nuclear pore glycoprotein complex containing p62" J.Biochem.113. 377-382 (1993)

Konami Kita：“含有 p62 的核孔糖蛋白复合物的纯化和表征”J.Biochem.113。