チタニアカラムを用いたハイスループットホスホプロテオーム解析法の開発

二氧化钛柱高通量磷酸化蛋白质组分析方法的开发

• 批准号: 19651085
• 负责人: 堀米 恒好
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19651085/
• 关键词: ホスホプロテオーム; リン酸化ペプチド; チタニアカラム; ホスホプロテオミクス; リン酸化プロテオーム; リン酸化ペプチド精製装置; ホスホプロラオーム

1.チタニアカラムに結合する非リン酸化ペプチドの除去法の検討の継続。アフリカツメガエル卵抽出液のタンパク質混合物のトリプシン分解物をチタニアカラムに添加した後種々の洗浄法、洗浄溶媒その他を適用し次のような結果を得た:1)イソプロパノールによる洗浄が有効である、2)3-サイクル洗浄法が有効である、3)高感度の質量分析計(MS)の使用が有効である。そこでこれらの方法を組み合わせて洗浄/分析条件を最適化し、これまでフリカツメガエル卵抽出液タンパク質のトリプシン分解物から288本のリン酸化ペプチドしか検出できなかったものを、1382本のリン酸化ペプチドを検出できるまでに精製度の上昇と大幅な高感度化に成功した。2.精製リン酸化ペプチドの内部アミノ酸配列同定法の検討。これまでは得られたリン酸化ペプチドのアミノ酸配列は調べていなかったが、精製リン酸化ペプチドをLC-MS/MS法で内部アミノ酸配列を解析して、アフリカツメガエル卵抽出液タンパク質のトリプシン分解物から、338本のリン酸化ペプチドのアミノ酸配列を同定できるようになった。3.全自動装置の構築これまでの結果は新たに構築した全自動リン酸化ペプチド精製装置を用いた結果であることから、この装置を用いることにより全自動でリン酸化ペプチドの精製ができることが示された。4.学会発表で研究結果を公表するとともに、精製法と精製装置について特許出願した。

1. The research and development of the method of removing the non-acidifying compound from the mixture. The results obtained are as follows:1) the use of a simple washing method, 2) the use of a 3-dimensional washing method, 3) the use of a high sensitivity mass spectrometer (MS). The method was combined to optimize the washing/analysis conditions, and the results were successful in improving the purification system and greatly increasing the sensitivity of the extract. 2. A Study on the Method of Acid Matching and Determination for the Purification of Acid The acid sequence in the extract was analyzed by LC-MS/MS, and the acid sequence in the extract was determined by LC-MS/MS. 3. The results of the construction of the fully automatic device are similar to the results of the use of the newly constructed fully automatic acidification filter refining device. The fully automatic acidification filter refining is now possible. 4. The results of the study were published by the Institute of Fine Arts and Fine Arts, and were published by the Institute of Fine Arts and Fine Arts.

项目成果

チタニアカラム利用天然試料由来のリン酸化ペプチド精製法

使用二氧化钛柱从天然样品中纯化磷酸化肽的方法

• 发表时间: 2007

チタニアカラムを用いた全自動リン酸化ペプチド精製装置の開発

二氧化钛柱全自动磷酸化肽纯化装置的研制

• 发表时间: 2007
• 作者: 堀米恒好;他4名
• 通讯作者: 他4名

チタニアカラムを用いた全自動リン酸化ペプチド精製法の改良と応用

二氧化钛柱全自动磷酸化肽纯化方法的改进及应用

• 发表时间: 2008
• 作者: R. L. Ohniwa;K. Morikawa;J. Kim;T. Kobori;K. Hizume;R. Matsumi;H. Atomi;T. Imanaka;T. Ohta;S. H. Yoshimura & K. Takeyasu;橋本健志;岩瀬 由佳
• 通讯作者: 岩瀬 由佳

リン酸化ペプチドの精製方法及び精製装置

磷酸化肽的纯化方法及纯化装置

• 发表时间: 2008