培養細胞を用いた機能性タンパクデリバリーシステムの開発

使用培养细胞开发功能性蛋白质递送系统

• 批准号: 14656103
• 负责人: 矢野 秀雄
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14656103/
• 关键词: IGF-I; NIH3T3細胞; ディフュージョンチェンバー; タンパクデリバリーシステム

動物の成長を促進する機能性タンパクを大量に発現する線維芽細胞株を樹立し、それをメンブレンフィルターによって宿主遊走細胞は侵入できないが、宿主動物の体液成分の栄養およびホルモン等は自由に行き来できるディフュージョンチェンバー内に封入して動物体内に移植することにより、機能性タンパクの発現を長期的に維持し動物の成長を促進させようとするシステムの確立を計った。まずこのタンパクデリバリーシステムの最初のモデル系として機能性タンパクにインスリン様成長因子(IGF-I)を用いることにした。昨年度単離したステーブルにマウスIGF-Iを発現するマウス線維芽細胞株であるNIH3T3細胞株について、遺伝子が組み込まれる領域によって発現量が異なると思われるので、複数の細胞株についてそれぞれの培養培地を回収しWestern BlottingによりIGF-Iの発現を調べたが、濃縮を行っても培養培地でのIGF-Iの発現は確認することができなかった。この理由としてIGF-Iの分泌量がWestern Blottingの検出限界以下であること、あるいは培地中のプロテアーゼにより分泌されたIGF-Iが分解を受けてしまったことが考えられたため、タンパクの発現量ではなく、RT-PCRにより各細胞株でのIGF-IのmRNA発現量を比較し、その発現量の高い株を選択した。このようにして得られた細胞をディフュージョンチェンバー内に封入し、マウスの腹腔内に移植した。コントロールベクターをトランスフェクトしたNIH3T3細胞を埋め込んだマウスとの増体について3ヶ月に渡り比較したが、有意な差は得られなかった。実験終了後取り出したチェンバー内でのIGF-Iの発現についてはRT-PCRにより確認できた。ステーブルにマウスIGF-Iを発現するNIH3T3細胞株でのIGF-Iの発現量が予想外に低かったために増体に対する効果が得られなかったと考え、今後はさらに強力なプロモーターを有するベクターを用いて機能性タンパクデリバリーシステムの確立をめざす。

The growth of animal products promotes the establishment of a large number of cell lines, cells, host cells, host cells, body fluid composition, cell growth, cell growth, growth, The long-term maintenance of long-term growth of mechanical properties promotes the establishment of a high-performance accounting system. In the first place, the mechanism of growth factor (IGF-I) was used to determine whether or not the growth factor was affected. In the year of last year, we were told that there was an increase in the number of sprouts in the cell line, in the field of IGF-I, in the field, in the field, in the Please make sure that you do not know what you are going to do. You will need to know that you will not be able to IGF-I. The reason for this is that the secretion of IGF-I, Western Blotting, the secretion of IGF-I, the secretion of IGF-I, the amount of mRNA, the amount of IGF-I, the amount of each cell line, the secretion level, the secretion, the secretion, I need to know if I can get a transplant in the abdominal cavity. I don't know what to do. I don't know. I don't know. After you have finished reading, check out the IGF-I to confirm that you are not allowed to do so. Do you want to know that the NIH3T3 cell line is affected by the number of IGF-I cells? this is not the case. In the future, it is necessary to make sure that you have the ability to make sure that you are in good condition.