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新規接着因子ninjurinの強制発現を用いたsenescence分子機構の解明

利用新型粘附因子ninjurin的强制表达阐明衰老的分子机制

基本信息

批准号：
14657130
负责人：
佐々木裕
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Kumamoto University (2003)Osaka University (2002)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657130/
关键词：
ninjurin senescence 癌細胞接着因子細胞周期 G1 arrest p21 肝癌

项目摘要

Ninjurin 1はhomophilicな接着活性を呈する新規接着因子であり(Neuron 1996)、さまざまな上皮組織、とりわけ肝臓で強く発現しているが未だその役割は明らかでない。そこで強制発現系を用いてninjurin 1の生理学的な意義を検討した。Ninjurin 1-cDNAをヒト肝癌細胞株Huh-7に遺伝子導入して作製した強制発現細胞株Nin1、Nin2細胞では、親株やmock細胞に比較して形態学的に細胞が大きくて平坦であった。またdoubling timeはmock株が36時間であるのに対して約4日と著明に遷延していた。またアポトーシスはNin1、Nin2細胞においてはmock細胞より低下おり、G0/1期の細胞の有意な増加とS期の細胞の低下を認められたことより、細胞増殖の遅延はアポトーシスによるものではなく、G1/S期での停止(G1 arrest)が関与していると考えられた。さらに細胞周期関連因子群の解析では、CDK2活性の低下とCDK阻害剤p21蛋白発現の増強が認められた。p21は主にcyclin-CDK2複合体に結合してCDK活性を低下させ、Rb蛋白の燐酸化を阻害して最終的にはG1 arrestを誘導することから、ninjurin 1の強制発現はp21-CDK2系を介してG1 arrestを誘導することが明らかになった。このようなninjurin 1強制発現により認められた細胞生物学的特徴は、細胞分裂の終末像であるcellular senescenceの特徴と一致していた。そこでcellular senescenceを示すβガラクトシダーゼ活性と自家蛍光を解析した。βガラクトシダーゼ陽性細胞はmock細胞においてほとんど認められなかったのに対してNin1、Nin2細胞では20%強の比率で認められた。またNin1、Nin2細胞では自家蛍光が増強していた。これらの特徴から、ninjurin 1の強制発現は癌細胞にcellular senescenceを誘導することが明らかとなった。cellular senescenceはアポトーシスと同様に強力な癌抑制機構のひとつと考えられており、その破綻が細胞の無制御な増殖を引き起こすと考えられている。今回の結果からninjurin 1は肝細脚においてcellular senescenceを介して癌抑制機構へ関与していることが示唆された。

Ninjurin 1 has homophilic adhesion activity and new adhesion factors (Neuron 1996), epithelial tissue, liver tissue and liver tissue. The physiological significance of stress development system is discussed. Ninjurin 1-cDNA was introduced into hepatoma cell line Huh-7 to control stress induced cell lines Ninjurin 1 and Ninjurin 2. Compared with parent cells and mock cells, the morphological characteristics of Ninjurin 1-cDNA induced cell lines were significantly different. Doubling time is about 36 days. Nin1 and Nin2 cells are in the middle of the mock cell cycle, G0/1 cells are in the middle of the mock cell cycle, G1/S cells are in the middle of the mock cell cycle, G1/S cells are in the middle of the mock cell cycle, G1/S cells are in the middle of the mock cell cycle, and G1/S cells are in the middle of the mock cell cycle. The analysis of cell cycle-related factors revealed that CDK2 activity decreased and CDK inhibitor p21 protein expression increased. p21 binds to the cyclin-CDK2 complex, reduces CDK activity, inhibits phosphorylation of Rb protein, and ultimately induces G1 arrest. Ninjurin 1 stress expression is mediated by the p21-CDK2 system, and induces G1 arrest. The characteristics of cell biology and the characteristics of cellular senescence in the terminal image of cell division are consistent with each other when this phenomenon occurs under stress. The cellular senescence was analyzed. The ratio of β-positive cells to mock cells was 20%. Nin1 and Nin2 cells were found to have increased light intensity. The expression of cellular senescence in cancer cells was induced by stress. Cellular senescence is a powerful cancer suppressor. It can be used to control cell proliferation. The results of this study showed that the tumor suppressor mechanism was closely related to the cellular senescence of the liver.