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VP22fusion proteinを用いた非ウイルス膵癌遺伝子治療ベクターの開発

利用VP22融合蛋白开发非病毒胰腺癌基因治疗载体

基本信息

批准号：
14657294
负责人：
近藤哲
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

治療遺伝子が導入された標的細胞と同時に周囲に存在する遺伝子非導入細胞を同時に抑制する治療遺伝子を構築することを目的として、VP-22遺伝子とアポトーシス誘導遺伝子を融合させた治療遺伝子を構築した。制限酵素切断部位を導入した相補的プライマーを用いて、GFP(レポーター用)、p53、Bax遺伝子をPCR法で増幅させ、VP-22遺伝子の下流に組み込んだ。VP-22-GFPは発現細胞の周囲においても発光が確認され、VP-22融合による効果が確認された。VP-22-p53は細胞抑制効果はみられたものの、比較対照用として用いたp53との間に有意な差は認められなかった。VP-22-Bax発現ベクターは各種のプロモーターを用いたが、構築することは不可能であった。一方で、DNA結合ドメインと細胞膜通過ドメインを同時に有するペプチドを合成し、これがDNAと電気的に結合してヒト培養細胞株に遺伝子を輸送し、レポーター遺伝子であるGFP遺伝子を発現させることを明らかにした。さらに、この機序がエンドサイトーシスであること、遺伝子導入効果がクロロキンや塩化アンモニウムによって増幅されることをみいだした。また、この効果は多くの細胞株(ヒト正常細胞株、肺癌細胞株、膵癌細胞株、食道癌細胞株)で、従来の遺伝子導入方法であるリポフェクション法と比較して高いことが明らかとなったほか、使用濃度での細胞毒性はほとんど観察されなかった。このポリペプチドの細胞膜通過ドメインを他の接着因子(RGD)などに置換したペプチドでは高い遺伝子導入は確認されなかった。さらにペプチドに核移行シグナルが存在することが重要であることが示唆された。(論文投稿中)

The therapeutic gene is introduced into the target cell and simultaneously exists in the non-introduced cell and simultaneously inhibits the therapeutic gene construction. The VP-22 gene is introduced into the target cell and simultaneously exists in the non-introduced cell and simultaneously inhibits the therapeutic gene construction. restriction enzyme cleavage site introduced into the complement of the protein, GFP(protein), p53, Bax protein PCR amplification, VP-22 protein downstream group VP-22-GFP was identified as a fusion protein in the cell cycle and as a fusion protein in VP-22. VP-22-p53 cell inhibition effect is different from that of p53. VP-22-Bax appears to be a variety of applications, construction, and impossibility. DNA binding to cell membranes is carried out simultaneously by DNA and electrical binding to cell lines, and GFP gene expression is carried out simultaneously by DNA and electrical binding. In this case, the mechanism for introducing the gene into the system is to increase the amplitude of the gene. The results of this study are as follows: (1) There are many cell lines (normal cell lines, lung cancer cell lines, cancer cell lines, esophageal cancer cell lines), and (2) There are many methods for introducing the gene into cells. The cell membrane of this species is confirmed by the introduction of a high protein into the cell membrane by the addition of a protein to the cell membrane. This is the first time that a nuclear power plant has been established. (Paper submission in progress)