ホーミングを応用したデリバリーシステムによる血管新生阻害因子PEDF遺伝子治療

使用归巢递送系统的血管生成抑制因子 PEDF 基因治疗

• 批准号: 21390353
• 负责人: 近藤 哲
• 金额: $ 11.73万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21390353/
• 关键词: PEDF; 血管新生; 遺伝子治療; 細胞治療

野生型のBalb/cマウスより末梢血を採取し、MACS(Magnetic Cell Sorting)を用いで樹状細胞(DC)を分離・破棄した後、再度MACSを用いてリンパ球分画を分離する。分離したリンパ球を適切なサイトカイン環境の下で培養し、別途調製したLv-PEDFを感染させてPEDFの遺伝子導入を施行した。PEDF遺伝子と同時に発現されるGFPによって識別・分離が可能であるが、血球細胞への遺伝子導入効率がきわめて不良であったためFACSで分離が不能であった。導入方法を従来法から、新規に開発したTAT-pKペプチド併用に変更し、数%の導入細胞が得られたが、これらからPEDF産生リンパ球の純粋培養は成功しなかった。対照として、GFP単独で遺伝子導入した場合は遺伝子導入リンパ球を分離し純粋に培養することが可能であった。以上を踏まえ、癌細胞株をリンパ球に見立て、これを材料として擬似的な実験系が機能するかどうかを検証したと同時に、癌を移植する部位とは異なる部位の正常組織にLv-PEDFを感染させてPEDFの遺伝子導入が可能であるかどうかを調べた。過去に実績のある食道癌細胞株であるHEC46にPEDFの遺伝子導入を行ってPEDF発現細胞株(HEC46-PEDF)を樹立し、共培養した血管内皮細胞の増殖や遊走などが低下すること、これをマウスに移植してできた腫瘍における血管内皮前駆細胞(EPC)の数が少ないことなどを確認したと同時に、同腫瘍とは離れた部位に移植した他の癌細胞株の腫瘍増殖が抑制される現象を見いだした。一方で、血中に分泌されていると予想されるPEDFの検出をELISA法で試行したが、検出限界内での値は存在せず、同時におこなった正常組織への遺伝子導入でも検出されないことが判明した。

Wild type Balb/c cells are isolated from peripheral blood, MACS(Magnetic Cell Sorting) is used to isolate dendritic cells (DC), and MACS is used to isolate dendritic cells. Isolation of PEDF from Lv-PEDF and introduction of PEDF from Lv-PEDF PEDF gene is simultaneously detected by GFP gene recognition and separation, and the gene introduction rate of blood cells is detected by FACS gene separation. The method of introduction was developed by new method and several percent of the introduced cells were successfully cultured in pure culture. For example, if a GFP gene is introduced into a cell, it may be possible to isolate and culture the cell. The above mentioned tumor cell lines are isolated from the sphere, and the material and the analog system are functional. At the same time, the tumor transplantation site is different from the normal tissue. The introduction of Lv-PEDF gene is possible. Previous achievements in esophageal cancer cell line HEC46 and PEDF gene transfer to develop PEDF cell line (HEC46-PEDF) was established, co-cultured, and the proliferation and migration of vascular endothelial cells (EPC) were inhibited. The number of EPC cells was reduced and the proliferation of other cancer cell lines was inhibited. ELISA was used to detect the presence of PEDF in the serum and normal tissues, and to detect the presence of PEDF in the serum.