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組織再生型人工神経を用いた横隔神経の再建と横隔膜機能回復の研究

利用组织再生人工神经重建膈神经及膈肌功能恢复的研究

基本信息

批准号：
14657321
负责人：
横見瀬裕保
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kagawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は切断された横隔神経に人工神経を移植し神経線維を再生させ、呼吸機能の回復を目的とする。これまでコラーゲン被覆したPGA織布管の中にコラーゲンスポンジを留置しラミニンコーティング・NGF徐放化を施した人工神経を開発し臨床応用されている。しかし人工神経の材料の最適化にはまだ改良の余地がある。そこでコラーゲンスポンジの架橋法、様々な徐放成長因子の組み合わせの検討を行い細胞培養で神経軸索再生の程度を比較した。PC12培養による軸索伸展の程度とコラーゲンスポンジ作製法ではグルタールアルデヒド(GA)架橋と乾熱架橋法を検討し、GA架橋では0%、乾熱架橋法では約10%のPC12細胞に放射状軸索伸長を認めた(平成15年度成果)。乾熱架橋法の凍結温度変化(-80℃、-20℃)によるスポンジの空隙の大きさはそれぞれ100〜500μm、500〜1000μmであった。PC12軸索伸長は100〜500μmで15%程度、500〜1000μmで15%程度であった。空隙の大きさによる軸索伸長に変わりはなかったがスポンジ表面に撒布したPC12細胞は500〜1000μmの空隙を持つ-20℃スポンジで約1mmの深度まで細胞が確認できた(平成16年度成果)。生後ラット後根神経節細胞(DRG)の初代培養法を確立した(平成15年度成果)。頚部交感神経節細胞(SCG)初代培養法を確立した(平成16年度成果)。DRG・SCG共にGA架橋スポンジでは軸索伸長を認めず、乾熱架橋法で2〜5%の軸索伸長を認めた。ついで-80℃凍結乾燥後の乾熱架橋コラーゲンスポンジ状で軸索伸長をPC12,DRG,SCGの培養を行い、NGF,BDNF, Bern University Prof.Weiss提供神経成長因子の添加の有無と軸索伸長を検討した。NGFは軸索伸長・細胞生存に必須であった。他の因子は軸索伸長には有意差を認めなかった。

The aim of this study is to cut off the transverse nerve and restore the respiratory function. This is the first time that a person has ever been involved in an artificial brain disease. There is room for improvement in the optimization of artificial neural materials. To compare the degree of axonal regeneration in cell culture by using the bridging method and the combination of growth factors. The extent of axonal elongation in PC12 culture was investigated by GA bridging method and dry heat bridging method. The radial axonal elongation of PC12 cells was determined by GA bridging method and dry heat bridging method (Heisei 15). Freezing temperature of dry heat bridging method changes (-80℃,-20℃), and the gap size of dry heat bridging method is 100 ~ 500μm, 500 ~ 1000μm. PC12 Axle elongation is 100 ~ 500μm <$15%, 500 ~ 1000μm <$15%. A gap of 500 ~ 1000μm in the surface of PC12 cells and a gap of about 1mm in the depth of PC12 cells at-20℃ were confirmed (Heisei 16 results). Establishment of primary culture method for postnatal root ganglion cells (DRG)(Heisei 15) Establishment of primary culture method of sympathetic ganglion cells (SCG)(Heisei 16) DRG·SCG total GA bridging method can be used for shaft elongation recognition, and dry heat bridging method can be used for shaft elongation recognition of 2 ~ 5%. Dry heat bridge temperature after freezing and drying at-80℃. Axonal elongation of PC12,DRG and SCG in culture, NGF,BDNF, Bern University Prof. Weiss provides axonal elongation with or without the addition of growth factors. Axle elongation is essential for cell survival. He has a factor of axle elongation.