組換え遺伝子導入シュワン細胞を用いた脳内白質の再生の試み

尝试使用重组转基因雪旺细胞再生大脑中的白质

• 批准号: 14657348
• 负责人: 山田 和雄
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657348/
• 关键词: シュワン細胞; オリゴデンドロサイト; MSP; 凍結損傷モデル; 脳虚血モデル; 遺伝子発現; 蛋白発現; 脳梁損傷モデル; 蛋白表現

白質損傷後の脳機能再生を図るため、遺伝子導入したシュワン細胞を脳内移植し、脳機能変化をみることを本研究の主眼として始めた。本年度は白質損傷モデルとして、脳梁損傷モデル、凍結損傷による脳梁機能障害モデル、虚血性脳梁損傷モデルを用いて上記試みの準備研究を進めた。まずラット凍結脳損傷モデルを用い、白質オリゴデンドロサイト活性の指標として、MSP遺伝子と蛋白の発現を検討した。MSP(Myelencephalon-specific protease)は新規のセリンプロテアーゼで、白質のオリゴデンドロサイト、ミクログリア、神経細胞に多く存在し、ミエリンの代謝に関与することが知られている。その結果、凍結損傷後1-3日して損傷直下の白質にMSPmRNAと蛋白陽性のオリゴデンドロサイトが出現し、浮腫の進展に応じて、損傷遠隔部位の白質まで、陽性細胞が出現することを確かめた。また、mRNAと蛋白の発現は同時に並行して変化することも確かめられた。ついでラット脳虚血モデルを用いて、MSPの発現を検討すると、虚血周囲の白質に虐血後1-3日して発現することが認められた。これらの所見から、各種の白質損傷モデルでは損傷に応じてオリゴデンドロサイトの活性化がおこり、これが損傷後のミエリン修復に関与することが明らかとなった。同時にbrain derived neurotrophic factor (BDNF)およびinterferon gammaを組み込んだレトロウィルスベクターを作成し、それを用いてWisterラットから採取したシュワン細胞に遺伝子導入した。遺伝子導入されたシュワン細胞をジェネシチン(G418)でセレクションをかけながら、シングルコロニーを採取してシングルクローンとした。そうして得られた遺伝子組み換えシュワン細胞のシングルクローンのうち、増殖などに問題の無かったものを選択して増殖させ、移植の準備段階は整えることができた。研究期間は終了してしまったが、次の段階として作成した遺伝子組み換えシュワン細胞をラット脳梁損傷モデルに移植するなど、今後も研究を継続していく予定である。

The main purpose of this study is to investigate the effects of gene transfer on cell regeneration after linear injury. This year, we are conducting preparatory research on the use of linear damage indicators, beam damage indicators, beam functional impairment indicators for freezing damage, and virtual blood beam damage indicators. To investigate the expression of MSP gene and protein in the expression of MSP gene. MSP(Myelencephalon-specific protein) is a new type of protein, which can be used as a marker of protein metabolism, and a marker of protein metabolism. Results: 1-3 days after freezing injury, MSP mRNA and protein positive cells appeared in the line directly below the injury, edema progressed, and positive cells appeared in the line at the distant site of injury. The expression of mRNA and protein was determined simultaneously. 1-3 days after the occurrence of MSP, the occurrence of MSP is detected. All kinds of linear damage are observed, and the activation of the damage is related to the repair of the damage. At the same time, brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and interferon gamma are used to construct and introduce genes into cells. The following information is provided for the purposes of this document: For example, if you are a child, you can choose to grow up and prepare for transplantation. The study period was completed and the next stage was completed.

项目成果

Yamamoto N., Yamada K, et al.: "Alterations in the expression of the AQP family in cultured rat astrocytes during hypoxia and reoxygenation"Mol Brain Res 90:26-38, 2001. 90. 26-38 (2001)

Yamamoto N.，Yamada K，等人：“缺氧和复氧期间培养的大鼠星形胶质细胞中 AQP 家族表达的改变”Mol Brain Res 90：26-38，2001.90.26-38（2001）

Aihara N, Yamada K, et al.: "Intracerebral hemomhage upregulates Na+/myoinositol cotransporter in the rat brain"Neurosci Lett. 327. 21-24 (2002)

Aihara N、Yamada K 等人：“脑内出血上调大鼠大脑中的 Na /肌醇协同转运蛋白”Neurosci Lett。

Katano H, Asai K, Yamada K, et al.: "A metabotropic glutamate receptor antagonist, alpha-methyl-4-carboxyphenylglycine, attenuates immediate early gene mRNA expression"Neurosci Lett. 306. 101-105 (2001)

Katano H、Asai K、Yamada K 等人：“代谢型谷氨酸受体拮抗剂 α-甲基-4-羧基苯基甘氨酸可减弱早期基因 mRNA 表达”Neurosci Lett。

Fujita M, Aihara N, Yamada K: "Regulation of rat hippocampal neural cadherin in the kainic acid induced seizures"Neurosci Lett 297:13-16, 2001. 297. 13-16 (2001)

Fujita M、Aihara N、Yamada K：“红藻氨酸诱导的癫痫发作中大鼠海马神经钙粘蛋白的调节”Neurosci Lett 297:13-16, 2001. 297. 13-16 (2001)

Ueda T, Yamada K, Shimada S et al.: "Diffuse brain injury induces local expression of Na+/myo-inositol cotransporter in the rat brain"Mol Brain Res. 86. 63-69 (2001)

Ueda T、Yamada K、Shimada S 等人：“弥漫性脑损伤诱导大鼠脑中 Na /肌醇协同转运蛋白的局部表达”Mol Brain Res。