RNA干渉を用いた血管内皮細胞インターロイキン発現抑制による敗血症組織傷害の緩和

利用 RNA 干扰抑制血管内皮细胞白细胞介素表达减轻化脓性组织损伤

• 批准号: 21659365
• 负责人: 荒井 俊之
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659365/
• 关键词: 血管内皮細胞; LPS; インターロイキン8; 活性酸素; siRNA; NADPHオキシダーゼ-1; 播種性血管内凝固症候; 組織因子; 遺伝子導入; MTTアッセイ; リアルタイムPC; ゲル電気泳動; ELISA

本年度は、正常ヒト臍帯静脈血管内皮細胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)を用いて、敗血症病態形成におけるNADPHオキシダーゼ-1(Nox1)の役割を検討した。先ずLPS刺激によりHUVECがIL-8ならびに活性酸素(ROS)を産生することを確認した。次にIL-8刺激によりHUVECがROSを産生すること、IL-8誘導ROS産生はLPS誘導ROS産生(2時間以上)に比べ、短時間(1時間以内)であること、IL-8受容体(CXCR1, 2)の中和抗体やIL-8特異的siRNAの前処理によりLPS誘導ROS庫生が部分的に抑制されることを明らかにした。これらの所見から、HUVECにおいて、LPS刺激によるROS産生はIL-8を介することが示唆され,た。また、LPSおよびIL-8誘導ROS産生はNox阻害剤であるDPIの前処理により完全に抑制されることから、両者ともにNox依存性であることが明らかとなった。現在までにNoxは5種類のアイソザイムが知られており(Nox1-5)、HUVECにおけるNoxファミリーのmRNA発現を検討したところ、Nox2, 4は恒常的に発見し、Nox1はLPSやIL-8刺激により誘導されることが明らかとなった。誘導型NoxであるNox1の生体内の役割は不詳な点が多く、敗血症病態への関与は明らかでなかったため、Nox1に焦点を当てて検討を行った。その結果、Nox1特異的siRNAでHUVECを処理したところ、LPS誘導ROS産生は有意に抑制された。敗血症において、播種性血管内凝固症候群(DIC)は重要な合併症の一つであり、DICの発症には凝固カスケードの最上流に位置する組織因子(tissue factor, TF)の発現が重要な役割を果たす。TF発現はLPS刺激により誘導されるが、ROS消去剤であるNACの前処理によりLPS誘導TFの発現が抑制され、TF発現におけるROSの関与を示した。また、IL-8およびNox1各々の特異的siRNAをHUVECに導入したところ、LPS誘導TF発現が抑制された。以上の所見から、HUVECにおいて、LPS刺激は先ずIL-8産生を誘導し、次いでNox1発現を介してROSを産生し、さらにROSはTFの発現を誘導することが明らかとなった。

In this year, を and normal ヒト human umbilical vein endothelial cells (HUVEC)を were used to fight た with て and sepsis-morbid におけるNADPH ゼ キシダ ゼ ゼ-1(Nox1) <s:1>. First, ずLPS stimulates によ <s:1> HUVECがIL-8ならびに active acid (ROS)を to produce する する とを とを to confirm た た. Time に IL - 8 stimulus に よ り HUVEC が ROS を produce す る こ と, IL - 8 induced ROS produced は LPS induced by ROS (2 time) than べ に, (1) within a short period of time で あ る こ と, IL - 8 let body (CXCR1, 2) の neutralizing antibody や IL - 8 specific siRNA の 処 before Richard に よ り LPS induced by ROS, some born が に inhibiting さ れ る こ と を Ming ら か に し た. Seen こ れ ら の か ら, HUVEC に お い て, LPS stimulation に よ る ROS produced は IL - 8 を interface す る こ と が in stopping さ れ, た. ま た, LPS お よ び IL - 8 induced by ROS produced は Nox resistance against tonic で あ る DPI の 処 before Richard に よ り に completely inhibit さ れ る こ と か ら, struck と も に Nox dependency で あ る こ と が Ming ら か と な っ た. Now ま で に Nox は 5 kinds の ア イ ソ ザ イ ム が know ら れ て お り (Nox1-5), HUVEC に お け る Nox フ ァ ミ リ ー の mRNA 発 を now beg し 検 た と こ ろ, Nox2, 4 は constant に 発 し, Nox1 は LPS や IL - 8 stimulus に よ り induced さ れ る こ と が Ming ら か と な っ た. Induction type Nox で あ る Nox1 の body cut は の service is unknown な point が く, sepsis pathological へ の masato Ming ら は か で な か っ た た め, Nox1 に focus を when て て 検 line for を っ た. Youdaoplaceholder0 <s:1> results, nox1-specific siRNAでHUVECを treatment たと たと ろ ろ, lPs-induced ROS production intentional に inhibition された. Sepsis に お い て, sow syndrome of intravascular coagulation (DIC) は important な complications の つ で あ り, DIC の 発 disease に は solidification カ ス ケ ー ド の the best に position す る tissue factor (tissue factor, TF) の 発 が now important な "を cut fruit た す. TF 発 now は LPS stimulation に よ り induced さ れ る が, ROS elimination tonic で あ る NAC の 処 before Richard に よ り LPS induced TF の 発 now が inhibit さ れ, TF 発 now に お け る ROS の masato and を shown し た. ま た, IL - 8 お よ び Nox1 each 々 の specific siRNA を HUVEC に import し た と こ ろ, LPS induced TF 発 now が suppression さ れ た. Seen above の か ら, HUVEC に お い て, LPS stimulation は ず IL - 8 を induced し, first time い で Nox1 発 を interface now し て ROS を し, さ ら に ROS は TF の 発 now を induced す る こ と が Ming ら か と な っ た.

项目成果

ATRA症候群における血管透過性亢進病態形成への活性酸素関与の可能性の検討

活性氧参与ATRA综合征血管通透性过高发病机制的可能性探讨

• 发表时间: 2009
• 作者: 三好隆史;山下浩平;荒井俊之;笹田昌孝;内山卓
• 通讯作者: 内山卓

The role of endothelial interleukin-8/NADPH oxidase axis in sepsis

内皮白细胞介素8/NADPH氧化酶轴在脓毒症中的作用

• 发表时间: 2010
• 期刊: Immunology
• 影响因子: 6.4
• 作者: Ito H;Yoshiyasu T;Yamaguchi O;Yokoyama O.;Miyoshi T
• 通讯作者: Miyoshi T