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RNA干渉を用いた血管内皮細胞インターロイキン発現抑制による敗血症組織傷害の緩和

利用 RNA 干扰抑制血管内皮细胞白细胞介素表达减轻化脓性组织损伤

基本信息

批准号：
21659365
负责人：
荒井俊之
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、正常ヒト臍帯静脈血管内皮細胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)を用いて、敗血症病態形成におけるNADPHオキシダーゼ-1(Nox1)の役割を検討した。先ずLPS刺激によりHUVECがIL-8ならびに活性酸素(ROS)を産生することを確認した。次にIL-8刺激によりHUVECがROSを産生すること、IL-8誘導ROS産生はLPS誘導ROS産生(2時間以上)に比べ、短時間(1時間以内)であること、IL-8受容体(CXCR1, 2)の中和抗体やIL-8特異的siRNAの前処理によりLPS誘導ROS庫生が部分的に抑制されることを明らかにした。これらの所見から、HUVECにおいて、LPS刺激によるROS産生はIL-8を介することが示唆され,た。また、LPSおよびIL-8誘導ROS産生はNox阻害剤であるDPIの前処理により完全に抑制されることから、両者ともにNox依存性であることが明らかとなった。現在までにNoxは5種類のアイソザイムが知られており(Nox1-5)、HUVECにおけるNoxファミリーのmRNA発現を検討したところ、Nox2, 4は恒常的に発見し、Nox1はLPSやIL-8刺激により誘導されることが明らかとなった。誘導型NoxであるNox1の生体内の役割は不詳な点が多く、敗血症病態への関与は明らかでなかったため、Nox1に焦点を当てて検討を行った。その結果、Nox1特異的siRNAでHUVECを処理したところ、LPS誘導ROS産生は有意に抑制された。敗血症において、播種性血管内凝固症候群(DIC)は重要な合併症の一つであり、DICの発症には凝固カスケードの最上流に位置する組織因子(tissue factor, TF)の発現が重要な役割を果たす。TF発現はLPS刺激により誘導されるが、ROS消去剤であるNACの前処理によりLPS誘導TFの発現が抑制され、TF発現におけるROSの関与を示した。また、IL-8およびNox1各々の特異的siRNAをHUVECに導入したところ、LPS誘導TF発現が抑制された。以上の所見から、HUVECにおいて、LPS刺激は先ずIL-8産生を誘導し、次いでNox1発現を介してROSを産生し、さらにROSはTFの発現を誘導することが明らかとなった。

This year, the human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) of vascular endothelial cells (VECs) have been cut in the form of blood NADPH (Nox1). First, LPS stimulation, HUVECs, IL-8, reactive acids (ROS), bioactive acids, HUVECs, IL-8, IL-8, IL The secondary IL-8 stimulates the secondary HUVEC ROS to induce pregnancy, the IL-8 induces the LPS to induce the ROS to compare, the short time (less than 1 time) to induce the pregnancy, the IL-8 receptor (CXCR1, 2) to neutralize the antibody to IL-8 specific siRNA, and the inhibition response to the LPS response to the ROS response. I don't know what I've seen. I don't know what I saw. I don't know what I saw. I didn't know what I saw. LPS stimulated ROS to give birth to IL-8. LPS, LPS, IL-8, Nox, Nox, DPI, Nox dependence, and Nox dependence. Now, in the Nox 5 category, we are aware that there is an error (Nox1-5), that is, an error (Nox1-5), a response (mRNA), a response (mRNA), a constant response (Nox2), a constant response (IL-8), and a response response (IL-8). In vivo, there are multiple points of operation, blood disease and disease, and the focus of Nox1 in vivo. The results of the experiment, the siRNA HUVEC response of Nox1, and the LPS guidance of ROS intentionally suppress the symptoms. Thrombocytopenia, disseminated intravascular coagulation syndrome (DIC), and DIC syndrome. Tissue factor (tissue factor, TF), tissue factor, tissue factor, tissue factor. TF showed that LPS stimulation induced LPS response, ROS deleted LPS response, TF response showed inhibition, TF response showed ROS response and response. The siRNA HUVEC of each specific Nox1 is imported into the LPS, and the LPS leads the TF to suppress the error. What you have seen above, HUVEC stimuli, LPS stimuli, IL-8 health guides, and secondary Nox1 stimuli, you will be able to introduce ROS health care, ROS health TF, and ROS health care.