骨髄間質細胞から膀胱組織の再生医療に関する研究

骨髓基质细胞膀胱组织再生医学研究

• 批准号: 14657411
• 负责人: 大東 貴志
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657411/
• 关键词: tissue engineering; bladder; differentiation

平成14年度ではマウス骨髄間質細胞を脱メチル化剤により分化し尿路上皮および平滑筋特異的タンパクのpromoterにGFPを組み込んだ発現ベクターで単離を試みたがうまくいかなかった。そこで今年度は脱メチル化剤の濃度、作用時間を変えて培養したマウス骨髄間質細胞からmRNAを抽出しRT-PCRを用いてスクリーニングしたところ、尿路上皮特異蛋白であるUroplakin-3 (UP3)、平滑筋蛋白であるSMAAの増幅が見られた。そこでFACSによる単離を試みたが、抗UP3抗体の入手ができなかったためSMAAのみ行った。しかしながらSMAA陽性に分化した細胞数が少なかったためかflowcytometryでは明らかなピークが得られず、やはり単離回収が困難であり、脱メチル化剤による分化誘導には限界が認められた。そこで発想を転換し、マウス膀胱より採取した平滑筋細胞を培養しその培養上清で骨髄間質細胞を培養したところ、間質細胞から平滑筋細胞に似た細胞が分化した。この細胞を回収しウェスタンブロッティングで各蛋白の発現パターンをみたところ膀胱平滑筋細胞の発現パターンと一致した。以上のことから膀胱平滑筋細胞培養上清中には間質未分化幹細胞から平滑筋に分化誘導する物質が含まれていることが類推された。現在平滑筋細胞上清中のどの物質が平滑筋分化の役割を担っているかを分画を作り検討中している。また膀胱上皮への分化は当研究期間中に達成できなかったが、現在マウス正常尿路上皮から初代培養した細胞を使って、共培養することにより組織のリモデリングができるかどうかを検討している。

Pp.47-53 14 year で は マ ウ ス を to take off the bone marrow stroma cells メ チ ル the tonic に よ り differentiation し urothelial お よ び smooth muscle specific タ ン パ ク の promoter に GFP を group み 込 ん だ 発 now ベ ク タ ー で 単 from を try み た が う ま く い か な か っ た. そ こ で off our は メ チ ル tonic の concentration and action time を - え て cultivate し た マ ウ ス bone marrow stroma cells か ら mRNA を spare し rt-pcr を with い て ス ク リ ー ニ ン グ し た と こ ろ different protein, urine road Pitt で あ る Uroplakin - 3 (UP3) The <s:1> increase of smooth gluten protein であるSMAA が can be found in られた. そ こ で both FACS に よ る 単 from を try み た が, resisting の UP3 antibody of が で き な か っ た た め SMAA の み line っ た. し か し な が ら SMAA positive に differentiation し た cells was less が な か っ た た め か flowcytometry で は Ming ら か な ピ ー ク が have ら れ ず, や は り 単 from 収 が difficult で あ り, メ チ ル the tonic に よ る induction に は limit が recognize め ら れ た. そ こ で 発 think を planning in し, マ ウ ス bladder よ り take し た smooth muscle cells are grown を し そ の を culture supernatant で bone marrow stroma cells develop し た と こ ろ, mesenchymal cells か ら smooth muscle cells に like た が differentiation し た. こ の cells を back 収 し ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ で each protein の 発 now パ タ ー ン を み た と こ ろ bladder smooth muscle cells の 発 now パ タ ー ン と consistent し た. Above の こ と か ら bladder smooth muscle cell culture supernatant of に は mesenchymal stem cell undifferentiated か ら smooth muscle differentiation inducing す に が る material containing ま れ て い る こ と が analogy さ れ た. Now smooth muscle cells in the supernatant の ど の material cutting の が smooth muscle differentiation service を bear っ て い る か を points draw を as り 検 beg in し て い る. ま た bladder epithelium へ は の differentiation in the study period に reached で き な か っ た が, now マ ウ ス normal urothelial か ら original culture し を た cells make っ て, trained す る こ と に よ り organization の リ モ デ リ ン グ が で き る か ど う か を beg し 検 て い る.

项目成果

Ohigashi T et al.: "Suppression of hormone-refractory prostate cancer by a novel nuclear factor kappaB inhibitor in nude mice"Cancer Res.. 63. 107-110 (2003)

Ohigashi T 等人：“在裸鼠中通过新型核因子 kappaB 抑制剂抑制激素难治性前列腺癌”Cancer Res.. 63. 107-110 (2003)

Ohigashi T, et al.: "Prediction of extraprostatic cancer by prostate specific antigen density, endorectal MRI, and biopsy Gleason score in clinically localized prostate cancer."Prostate. 53. 23-29 (2003)

Ohigashi T 等人：“通过前列腺特异性抗原密度、直肠内 MRI 和临床局限性前列腺癌活检格里森评分来预测前列腺外癌症。”前列腺。

Ohigashi T et al.: "Hypercalcemia and acute renal failure caused by production of parathyroid hormone-related protein from renal cell carcinoma"Scand J Urol Nephrol. 36. 149-151 (2002)

Ohigashi T 等人：“肾细胞癌产生甲状旁腺激素相关蛋白引起的高钙血症和急性肾功能衰竭”Scand J Urol Nephrol。

Ohigashi T, et al.: "Non-functional adrenocortical adenoma with extensive generation"Pathol Int. 53. 241-245 (2003)

Ohigashi T 等人：“具有广泛生成的非功能性肾上腺皮质腺瘤”Pathol Int。

Ohigashi T et al.: "Bcl-2 and androgen receptor gene expression in androgen-independent subclone derived from mouse androgen-dependent cells"Cancer Invest.. 20. 730-736 (2002)

Ohigashi T 等人：“源自小鼠雄激素依赖性细胞的雄激素非依赖性亚克隆中的 Bcl-2 和雄激素受体基因表达”Cancer Invest.. 20. 730-736 (2002)