軟骨分化に関与する因子の遺伝子解析を用いた検索

使用遗传分析搜索参与软骨分化的因素

• 批准号: 14657518
• 负责人: 坂本 一郎
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657518/
• 关键词: 軟骨分化; ATDC5; 軟骨分化特異的遺伝子; 遺伝子発現; cDNAマクロアレイ; ノーザンブロット法; 軟骨再生; 遺伝子発現パターン; RT-PCR; 細胞外マトリックス; プロテオグリカン

軟骨細胞株ATDC5を用い軟骨分化に関わる遺伝子を同定した。ATDC5はインシュリンおよびBMP2で軟骨細胞に分化することが報告されている。我々は、ATDC5を軟骨分化誘導かけた後、発現が変動する遺伝子をインシュリンで分化誘導した系とBMP2で誘導した系で比較解析した。分化誘導後0、4、8、12日におけるRNAを回収し、ノーザンブロット解析を用い軟骨特異的マーカーである、II型コラーゲンおよびアグリカンの発現解析した。この結果、インシュリンの系、BMP2の系で共に経時的に発現が上昇していることが確認された。次に、cDNAマクロアレイ解析により、1176個の遺伝子について、この2つの系において比較解析を行った。このcDNAマクロアレイの遺伝子のなかに含まれているアグリカン遺伝子は、ノーザンブロット解析の結果と非常に高い相関性を示した。cDNAマクロアレイ解析の結果、インシュリン、BMP2の両方の系で軟骨分化に伴い発現が上昇した遺伝子は、軟骨分化に重要な遺伝子であると考えられる。そのような遺伝子として、Early Growth Response 1(EGR-1)、Early Growth Response 3(EGR-3)、プレプロエンケファリン、VEGF-A、FN-1が同定された。本研究では、軟骨細胞株ATDC5を2つ因子により軟骨分化させ、その2つの系を比較することで、より軟骨分化に関わる遺伝子を同定しようと考えた。ATDC5はヘテロの細胞集団であることから、軟骨細胞に分化しないものも多く含むと考えられる。この2つの系で絞り込むことにより、軟骨分化に関わらない遺伝子を排除し、より軟骨分化に重要な遺伝子を同定できると考えた。その結果同定された5つの遺伝子は、将来、軟骨再生において重要な役割を果たす可能性がある。今後、その機能を解析していきたい。

Chondrocyte strain ATDC5 is used to differentiate cartilage and to determine the identity of cartilage. ATDC5 and BMP2 are involved in chondrocyte differentiation. We analyzed the differentiation and development of ATDC-5 cartilage in comparison with BMP-2. RNA recovery, type II DNA analysis and cartilage specific DNA analysis were performed on days 0, 4, 8, and 12 after induction. The results showed that the occurrence of BMP2 and BMP3 in the system increased significantly. The sequence, cDNA analysis, 1176 gene analysis, 2 system analysis were performed. The results of cDNA analysis showed a high correlation between the two genes. Results of cDNA analysis, analysis of BMP2 and BMP2 gene expression, cartilage differentiation, increased gene expression, cartilage differentiation, important gene expression Early Growth Response 1(EGR-1), Early Growth Response 3(EGR-3), VEGF-A and FN-1 are all identified. In this study, chondrocyte line ATDC5 was compared with two different cell lines for the identification of cartilage differentiation factors. ATDC5 is a cell cluster, chondrocyte differentiation, and cell proliferation. 2. Cartilaginous differentiation is related to the elimination of genetic material, and cartilage differentiation is important for the identification of genetic material. The results are the same as those of the five generations, and the future of cartilage regeneration is important. In the future, the function of the company will be analyzed.