中心小体構築突然変異体の網羅的単離の試み

尝试全面分离中心粒组装突变体

• 批准号: 14658228
• 负责人: 広野 雅文
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14658228/
• 关键词: クラミドモナス; 鞭毛基部体; bld10; bld2; 遺伝子外サプレッサー変異; 遺伝子内サプレッサー変異; 突然変異体; insertional mutagenesis; キネシン

中心小体は細胞周期ごとに自己複製によって形成されるという興味深い性質を持つ細胞内小器官だが,その構築機構は全くわかっていない.本研究はこの中心小体の構築機構を遺伝学的に解析するため,その形成に異常のあるクラミドモナス突然変異体を多数単離することを目的として行われた.我々は以前に中心小体(鞭毛基部体)を完全に欠失した突然変異体(bld10)を単離しているので,この変異株の表現型を参考にしてスクリーニングを行った.insertional mutagenesis法によって作出した変異株約250,000株をスクリーニングした結果,bld10と同様に分裂異常を示す基部体変異株と思われる株が8株得られた.遺伝解析の結果,このうち2株はbld10の,1株はbld2の新規alleleであることが判明した.他の5株は新規の変異株であった.このうちの1株は基部体が細胞前端部にクラスターを形成しており,中心小体の複製制御機構に異常があることが示唆された.残り4株については顕著な異常は観察されなかったが,基部体機能に何らかの異常を持つ株だと考えられる.今回得られた新規alleleをもちいて,bld10のサプレッサーが単離できたことも重要な成果の一つである.これまでbld10のサプレッサーは単離されていなかったが,今回合計8株が単離された.このうち3株はextragenic,5株はintragenicのサプレッサーであった.これらの株はBLD10の機能を研究する上で重要なツールになると考えられる.今回得られた8株のうち3株が既存の変異株のalleleであったことは意外な結果であった.その理由として,同じ変異誘発方法では得られる変異株が限られることなどが考えられる,このことも今後のスクリーニングにおいて重要な知見になると思われる.

Central body は cell cycle ご と に their copy に よ っ て form さ れ る と い う tumblers deep い nature を hold つ intracellular small organ だ が, そ の build institutions は full く わ か っ て い な い. This study は こ の center corpuscle の build institutions を but 伝 learn に parsing す る た め, そ の forming abnormal に の あ る ク ラ ミ ド モ ナ ス suddenly - variant を most 単 from す る こ と を purpose と し て line わ れ た. Before I 々 は に center corpuscle (flagellum basal body) を entirely に owe lost し た suddenly - variants (bld10) を 単 from し て い る の で, こ の - different strains の phenotype を reference に し て ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た. Insertional Mutagenesis method に よ っ て make し た - different strains of about 250000 strains を ス ク リ ー ニ ン グ し た results, bld10 と with others に abnormal division を す in basal body - different strains と think わ れ る seedlings have が 8 ら れ た. The results of the 伝 analysis <e:1> show that there are うち うち2 strains of <s:1> bld10 and 1 strain of <s:1> bld2. The new regulation alleleである とが とが is determined to be た. He の 5 strains は new rules の - different strains で あ っ た. こ の う ち の front-end が は basal body cells 1 strain に ク ラ ス タ ー を form し て お り, central body の replication system royal institution に abnormal が あ る こ と が in stopping さ れ た. Residual り 4 strains に つ い て は 顕 the abnormal な は 観 examine さ れ な か っ た が, basal body enginery に what ら か の abnormal を hold つ strains だ と exam え ら れ る. Now back to ら れ た new rules allele を も ち い て, bld10 の サ プ レ ッ サ ー が 単 from で き た こ と も important な results の つ で あ る. こ れ ま で bld10 の サ プ レ ッ サ ー は 単 from さ れ て い な か っ た が, today back to total 8 strains が 単 from さ れ た. こ の う ち 3 strains は extragenic, 5 strains は intr Agenic の サ プ レ ッ サ ー で あ っ た. こ れ ら の strains は BLD10 の function を research す る で important な ツ ー ル に な る と exam え ら れ る. Today back to ら れ た 8 strains の う ち 3 strains が existing の - different strains の allele で あ っ た こ と は accident な results で あ っ た. そ の reason と し て, with じ - different induced 発 method で は must ら れ る - different strains が limit ら れ る こ と な ど が exam え ら れ る, こ の こ と も future の ス ク リ ー ニ ン グ に お い て important な knowledge に な る と think わ れ る.

项目成果

Matsuura, K. et al.: "Bid10p, a novel protein essential for basal body assembly in Chlamydomonas : localization to the cartwheel, the first nine-fold symmetrical structure appearing during assembly"Journal of Cell Biology. (印刷中). (2004)

Matsuura, K. 等人：“Bid10p，衣藻基体组装所必需的新型蛋白质：定位于侧手翻，组装过程中出现的第一个九重对称结构”《细胞生物学杂志》（2004 年出版）。 ）

Hayashi, M.et al.: "Rescue of a Chlamydomonas inner-arm-dynein-deficient mutant by electroporation-mediated delivery of recombinant p28 light chain"Cell Motility and the Cytoskeleton. 53. 273-280 (2002)

Hayashi, M.等人：“通过电穿孔介导的重组 p28 轻链递送来拯救衣藻内臂动力蛋白缺陷突变体”细胞运动性和细胞骨架。

Matsuura, K.et al.: "Kinesin-II is not essential for mitosis and cell growth in Chlamydomonas"Cell Motility and the Cytoskeleton. 52. 195-201 (2002)

Matsuura, K. 等人：“驱动蛋白-II 对于衣藻细胞的有丝分裂和细胞生长不是必需的”细胞运动性和细胞骨架。

Hayashi, M. et al.: "Rescue of a Chlamydomonas inner-arm-dynein-deficient mutant by electroporation-mediated delivery of recombinant p28 light chain"Cell Motility and the Cytoskeleton. 53. 273-280 (2002)

Hayashi, M. 等人：“通过电穿孔介导的重组 p28 轻链递送来拯救衣藻内臂动力蛋白缺陷突变体”细胞运动性和细胞骨架。

Ikeda, K.et al.: "Rib72, a Conserved Protein Associated with the Ribbon Compartment of Flagellar A-microtubules and Potentially Involved in the Linkage between Outer Doublet"J.Biol.Chem.. 278. 7725-7734 (2003)

Ikeda, K.等人：“Rib72，一种与鞭毛 A 微管带区室相关的保守蛋白，并可能参与外双峰之间的连接”J.Biol.Chem.. 278. 7725-7734 (2003)