キメラアクチンを用いたアクチン分子の機能解析

使用嵌合肌动蛋白对肌动蛋白分子进行功能分析

• 批准号: 06740626
• 负责人: 広野 雅文
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06740626/
• 关键词: アクチン; キメラ分子; 機能ドメイン; 細胞性粘菌

他とは性質の異なるアクチンと一般的性質のアクチンとからなるキメラアクチンを細胞性粘菌に発現させ、細胞の運動性や分裂にどのような影響がでるかを、キメラアクチンのin vitroでの性質とあわせて解析することを試みた。いくつかのアクチン調製蛋白質と結合しないことがわかっているテトラヒメナ・アクチンの遺伝子と、一般的性質の細胞性粘菌のアクチン遺伝子とをアミノ酸84残基目の位置でつなぎ合わせ、N末側がテトラヒメナでC末側が粘菌のものをTet84Dic、逆につないだものをDic84Tetとして、これらを細胞性粘菌に導入・発現させた。Tet84Dicの精製2種のキメラアクチンのうち、Tet84Dicを内在性のアクチンと分離して精製することに成功した。Tet84Dicはテトラヒメナ・アクチンと同じくDNaseIと結合しないことがわかってしるので、DNaseカラムを精製のステップに組み入れることにより内在性アクチンて分離して精製した。精製されたTet84Dicは細胞性粘菌のアクチンに比べて重合しにくく、アクチンの重合条件下で超遠心しても1/3程度しか沈殿しないが、phalloidinを加えると沈殿するようになった。このことから、Tet84Dicはphalloidinと結合する性質を持つと考えられる。テトラヒメナ・アクチンがphalloidinと結合しないのは121番目のGlnがLsyへ、365番目のAlaがSerに変化していることによると考えられているが、今回の実験結果はこの考えを支持するものである。Tet84Dic発現細胞の増殖速度、運動性キメラアクチンを発現している細胞の増殖速度を検討した。Tet84Dicを発現している細胞は粘菌自身のアクチン遺伝子を導入した細胞に比べて増殖速度が1/3程度になり、Dic84Tetを発現している細胞は1/10程度であった。また、これらの細胞の運動性を調べるため、細胞を飢餓状態にして運動性を高めたものを経時記録し、画像解析によって細胞の変形量、移動量などを計測した。その結果、いずれのキメラアクチン発現細胞も運動量に関してはほとんど差がないことが明らかとなった。これらへの細胞への影響とキメラアクチンの細胞内局在との関係について現在検討している。

He said that he was not aware of the general sexual problems, such as the presence of cellular myxomycetes, the presence of cellular myxomycosis, the presence of cytophagia, the presence of cellular myxomycetes, the presence of cellular myxomycosis, the presence of cellular myxomycetes, the presence of cellular myxomycetes, the presence of cytophagia, the presence of cellular myxomycetes, the presence of cytopathic myxomycetes, the presence of cellular myx The combination of protein and protein showed that there was no significant difference between the two groups. In general, the cellular myxobacteria, the general sexual myxomycetes, the myxomyxobacteria, the myxomycetes, the my The cellular myxomycetes were found to be present. Tet84Dic is responsible for the separation of two types of equipment, and the Tet84Dic is used for internal separation. This is the Tet84Dic information system. This is the same as the DNaseI system. This is the combination of the information system, the DNase information system, and the internal information system. Under the condition of superposition, Tet84Dic, cellular myxomycetes, cytomyxomycetes, myxomyxomycetes, myxomycetes, myxomyxosis, and so on. The combination of Tet84Dic and phalloidin and the combination of sexual information and information will help you to obtain information. This is the most important thing in the world. The results show that we are in support of the results of the current study, which is based on the combination of the Gln Lsy, the Ala Ser, the Ala Ser, and the results of the examination. The speed of cell colonization and the rate of cell colonization were observed in Tet84Dic. Tet84Dic showed that the colonization rate of myxomycetes was higher than that of myxomycetes. The colonization rate of myxomycetes was higher than that of myxomycetes, and that of myxomycetes was higher than that of Dic84Tet. The pictures are recorded during the first half of the day, the shape of the cell, the amount of movement, the amount of movement, and the amount of movement. The results show that the volume of the cell is different. The volume of the cell is much higher than that of the cell. I don't know what's going on in the cell. there's a lot of money in the cell. there's a lot of money in the cell. there's a problem.

项目成果

Muto,E.et al: "Immunological detection of actinin the 14S ciliary dynein of Tetrahymena" FEBS Letter. 343. 173-176 (1994)

Muto,E.et al：“四膜虫肌动蛋白 14S 纤毛动力蛋白的免疫学检测”FEBS Letter。