精細管内遺伝子導入による新規なトランスジェニック動物作製法の開発

开发通过基因转移到生精小管生产转基因动物的新方法

• 批准号: 14658274
• 负责人: 多田 昇弘
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14658274/
• 关键词: Testis-mediated gene transfer(TMGT); レトロウイルスベクター; 精細管内注入; 精巣間質内注入; 精子幹細胞; トランスジェニック動物; Testis-mediated gene transfer (TMGT); リポゾーム; ウイルスベクター; マウス; 精原細胞; 遺伝子導入

我々は、精子細胞への遺伝子導入による遺伝子改変動物作製の可能性を明らかにするために、マウス精巣への遺伝子導入技術の開発に取り組んでいる。今までのところ、マウス精巣間質にDNA-リポゾーム複合体を注入した後、雌マウスとの交配により、注入されたDNAが受精を通じて効率的に胎児へ伝達されることを見出している。しかし、この方法では、導入された遺伝子のコピー数が極めて少ないことがわかっている。そこで、本研究は、レトロウイルスベクターを用いた遺伝子導入でも同様の現象が起こり得るのかを確認するとともに、精子幹細胞への効率の良い遺伝子導入法を開発することを目的として行った。本実験では、EGFP遺伝子を挿入したgene silencing抵抗性レトロウイルスベクターGCDNsapを生後10日齢及び8週齢のマウス精巣の間質及び精細管へ各々注入することにより、精子幹細胞及び精子細胞への遺伝子導入を試みた。次いで、生後10日齢及び8週齢のマウスは、ベクター注入後7週目及び4週目から雌と各々交配させ、産仔を得た。これらの産仔の尻尾についてサザンプロットを行い、導入遺伝子の存在を調べた。その結果、生後8週齢でGCDNsapを精巣に注入されたマウスからは、間質及び精細管内注入いずれにおいてもTg産仔は得られなかった。一方、生後10日齢でGCDNsapを精巣に注入されたマウスでは、精細管内注入においてのみTg産仔が確認された。また、これらのTg産仔由来の子孫において導入遺伝子の伝達及びEGFPの発現が確認された。このことから、精子形成が始まっていない幼若マウス精巣の精細管内への遺伝子導入により多コピーのTgマウスが得られることがわかった。なお、この成果については、平成16年度の第27回日本分子生物学会年会にて発表した。また、論文は投稿準備中である。

We do not know the possibility of changing the movement of sperm cells and sperm cells, and the possibility of changing the movement of animals is not possible. Now, after the DNA- virus is injected into the mother, the female will mate, and the pregnancy rate of DNA fertilization will reach the level of the pregnancy. Please tell me how to do it, how to do it, and how to count the number of children. In this study, we did a lot of research in this study. in this study, we did a lot of research in this study. in this study, in this study, we did not use this method to make sure that we were in the same group. The results showed that the sperm count rate was good. In this study, the gene silencing resistance test, the EGFP resistance test and the sperm injection were performed on the 10th day after birth, 10 days after birth and 8 days after birth. The sperm cells, sperm cells and sperm cells were injected into the spermatozoa. The second, 10th and 8th day after birth, 7 eyes and 4 eyes after injection, each female will mate and have a baby. Please tell me that there is a problem at the end of the rump. The results showed that 8 years after birth, the GCDNsap sperm was injected into the tubes of the baby, the baby, and the baby. On the other hand, 10 days after birth, GCDNsap was injected into the sperm tube to make sure that the baby was Tg. The reason for this is that the Tg has been registered and that the EGFP has been confirmed. The spermatozoa, spermatogenesis, sperm formation, spermatogenesis, spermatogenesis, spermatogenesis, The 27th Annual meeting of the Society of Molecular Biology of Japan in 16. The submission of the articles and articles is in preparation for submission.