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遺伝子組換え作物に起因する遺伝子汚染の評価法に関する研究

转基因作物遗传污染评价方法研究

基本信息

批准号：
15651007
负责人：
茗荷尚史
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Musashigaoka College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

【目的】平成15年度までに市販ダイズ加工品の89.7%から組換え遺伝子が検出されるもののその含有率は0.1%程度と、我国の消費流通過程に遺伝子組換え作物が薄く広く浸透しつつある実態を明らかにし、平成16年度は遺伝子組換え作物に起因する遺伝子汚染の実態を明らかにすべく基礎情報として、除草剤耐性組換えダイズRoundup Ready 40-3-2系統の導入遺伝子の変異出現の事実を確認し、さらにそのうちの一箇所に、表現系に影響を与える致命的なSNPが出現している可能性を指摘した。本年度は本研究の最終目的でもある遺伝子水平伝播の実証を得たので報告する。【方法】まずGMダイズRoundup Ready 40-3-2系統の栽培経験がある土壌および同GMダイズを飼料とした家畜の飼育土壌を日本各地計19箇所から採取し、細菌および真菌の分離を試みた。次に除草剤グリホサートによる選抜を繰り返し、得られたグリホサート耐性株から組換えDNAのPCR法による検出を行い、増幅断片の配列決定を行った。さらにこれら微生物株のrDNA解析をして種レベルの同定を行うとともに、昨年度作製に成功していた特異抗体を駆使して、Western-blot法による組換え遺伝子の発現解析を行った。【結果】採取土壌飼料中に生存していた9.8x10^9CFUの微生物株を対象にグリホサートによる選抜を行ったところ、51株のグリホサート耐性株を得た。これらのうち22株からGMダイズ由来の組換え遺伝子が検出された。PCR増幅断片の塩基配列はすべて決定したが、それらのうち14株の配列はGMダイズの人工的連結部位配列と完全に一致した。すなわちこの時点で遺伝子水平伝播の確証が得られた。さらにこれら14株中で組換え遺伝子が発現しているかを確かめたところ、2株で特異抗体に染色される想定サイズのバンドが観察された。これらの結果は、植物体から環境微生物への組換え遺伝子水平伝播の事実を始めて証明しただけでなく、その一部は発現していることを示している。また本研究で行ったプロセスは、除草剤によるセレクションステップを導入することにより、今まで検出できなかった超低頻度の遺伝子伝播をも評価可能とした成果であった。

[Objective] 89.7% of processed products in the market in 2015 and 89.7% of processed products in 2016 were contaminated by pollutants. The content of pollutants in processed products was reduced to 0.1%. The consumption and circulation process in China was characterized by the fact that pollutants in processed products were contaminated by pollutants in crops. The causes of pollutants in processed products in 2016 were clarified. To confirm the occurrence of mutation of introduced SNP in herbicide tolerance group Roundup Ready 40-3-2 system, and to evaluate the possibility of occurrence of mutation of introduced SNP in all sites and expression systems. This year, the ultimate goal of this study is to report on the results of genetic level transmission. [Method] The GM Roundup Ready 40-3-2 system was used to isolate bacteria and fungi from 19 sites in Japan. The selection of the secondary herbicide was determined by PCR. The rDNA analysis of these microbial strains was carried out successfully by Western blot analysis of the expression of recombinant DNA. [Results] 9.8x10^9 CFU of microorganism strains in soil feed were selected and 51 resistant strains were obtained. The 22 strains of GM were produced by the combination of GM and GM. PCR amplification fragment alignment is determined, and the alignment of 14 strains is completely consistent with the alignment of artificial linkage sites. The time and place of transmission are confirmed by the horizontal transmission. In addition, 14 strains of the group were detected, and 2 strains of the specific antibody were detected. The results of this study indicate that the plant body and the environmental microorganism are transformed into a new type of microorganism, and the horizontal propagation of the microorganism has been proved to be a new type of microorganism. The results of this study are as follows: (1) The results of this study are as follows: