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微細管関連細胞骨格の三次元構造及び関連蛋白の局在と機能

微管相关细胞骨架的三维结构及相关蛋白的定位和功能

基本信息

批准号：
61480091
负责人：
広川信隆
金额：
$ 1.79万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ザリガニ末梢神経軸索の細胞骨格構造を急速凍結・ディープエッチ法を用いて観察。その基本が微細管とその間のクロスブリッジ(CB)及び微細管と膜小器官の間の短いCBからなる事を明らかとした。生化学的にこの軸索より微細管関連蛋白(MAP)を単離し、その主要が270KDMAPである事またそれが100nm長の線維状構造である事、免疫細胞化学的にこの270KD蛋白が微細管の間のCBの主要素である事、及び膜小器官と微細管の間のCBが膜小器官の動きのモーター分子の候補である事を示した。2.牛脳より膜小器官の動きのモーターであるキネシン(124KD)をとり、その単分子構造を低角度回転蒸着法及び急速凍結法で観察、それが約50nm長の細長い分子である事を示した。3.モノクローナル抗体アフィニティーカラムを用いてMAP1Aの、またゲルロ過によるタウMAPを単離し、急速凍結法及び低角度回転蒸着法により前者が100nm長の後者が約50nm長の線維状分子である事を決定した。4.小脳プルキンエ細胞樹状突起の細胞骨格構造が微細管とその間の複雑に分枝吻合するCBの網目である事を急速凍結法により観察、二重標識免疫電子顕微鏡法によりMAP1A及びMAP2がその主要素である事、またMAP1A,MAP2は同一微細管上に共存する事が分った。5.ウニ卵より、MAPを採取、ゲルロ過により分離し主な成分として75KD蛋白を得、その性質及び分子形態を検討した。この蛋白は150KDつまりダイマーとして存在し、チュブリンの重合を促進する。又分子形態は8〜9nm径の球状で微細管表面に規則的に六角形配列をとって結合した。この構造はIn Vivoの細胞分裂装置微細管表面に我々が発見したポタン状構造と同一であり、75KDMAPがこのボタンを形成する事が判明した。このMAPは微細管の重合を促進するところから分裂装置の形成により重要な機能を有していると考えられる。

1. Rapid freezing of the cellular structure of the distal nervous axons. Basic micro-tube and micro-membrane small organ and micro-tube small organ Biochemistry studies showed that the major axis of microtube-associated protein (MAP) was 270 KD and the major axis of microtube-associated protein (MAP) was 100nm. Immunocytochemistry studies showed that the major axis of microtube-associated protein (MAP) was 270KD and the major axis of microtube-associated protein (MAP) was 270KD. 2. The molecular structure of small membrane organs was observed by low-angle evaporation method and rapid freezing method, and the thin molecules with a length of about 50nm were shown. 3. MAP1A and MAP 1B are used to determine the length of MAP1A and MAP 1B. Rapid freezing method and low angle evaporation method are used to determine the length of MAP 1A and MAP 1B. 4. The cellular structure of dendritic processes in microtubule was observed by rapid freezing method and double labeling immunoelectron microscopy. The main elements of MAP1A and MAP2 were observed by MAP1A and MAP2 respectively. 5. The main component of the protein is obtained by MAP extraction and rapid separation, and the properties and molecular form of the 75KD protein are discussed. The protein is 150KD and the protein is 150KD and the protein is 150 KD. The molecular morphology is 8 ~ 9nm in diameter and the surface of the microtube is regularly hexagonal. The structure of the cell division device In Vivo was found to be similar to that of 75KDMAP. The MAP promotes the formation of micro-tubes and splitters, and has important functions.