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神経軸索内オルガネラ輸送の機構

神经轴突内细胞器运输的机制

基本信息

批准号：
59440020
负责人：
広川信隆
金额：
$ 18.88万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (A)
财政年份：
1984
资助国家：
日本
起止时间：
1984 至 1985
项目状态：
已结题

项目摘要

IDPN中毒ラットの末梢神経を急速凍結ディープエッチ法で検討した所速い流れで送られる膜小器官は軸索中心部に集した微細管領域に集中して存在し、微細管領域は微細管同志の間のクロスブリッジと膜小器官と微細管の間の短いクロスブリッジより形成されている事が分かった。蛍光抗体法及び免疫電顕法で微細管同志の間のクロスブリッジは主にMAP1AとBで形成されている事が示された。ザリガニ巨大神経軸索を用いた実験では、単離した軸索内の小器官の動きを、微分干渉顕微鏡ビデオカメラ,タイムラプスレコーダーを用いて記録した。順行性と逆行性の動きが観察された。0.02%サポニンで処理後15分程でこの動きは完全に止ったが5mMATPを加える事により再開した。このATPを洗い流すと又動きは止った。この新鮮材料サポニン処理、ATP処理後の三種の軸索を急速凍結,ディープエッチ法で処理し電子顕微鏡で観察した。新鮮材料では可溶性蛋白の存在の為細胞骨格要素の明瞭な観察は困難であったが、サポニン及びATP処理群では明瞭に細胞骨格が観察された。それは微細管同志の間のクロスブリッジ及び微細管と膜小器管の間の短いクロスブリッジとから形成されていた。Fアクチンは軸索中心部には認められず微細管とクロスブリッジが膜器官の輸送にとり十分な構造である事が分かった。微細管に関連したクロスブリッジの化学組成を検討する為、ザリガニ末梢神経よりタクソールを用いたMAPsを生化学的に分離し主なMAPとして270KDの蛋白を同定した。これは熱処理に抵抗性で低角度回転蒸着法により約104nm長の桿状の蛋白でありラット脳よりとったチュブリンの重合を促進する事が示された。又抗MAP2抗体と反応し軸索を染めたのでこの270K蛋白が微細管同志の間のクロスブリッジの主要素である事が示された。従って膜小器官と微細管の間の25nm長のクロスブリッジがモーターである可能性が強く示唆された。

IDPN poisoning in the peripheral nerve rapid freezing method to detect the speed of flow, send small organs to the axis of the central part of the concentration of small tube area, small tube area of small tube homosexual between the two sides of the tube, the formation of small organs and small tube between the two sides of the tube. The light antibody method and the immunoelectric method are used to show the formation of micro-tube homosexuality. The large axis of the brain is used to record the movement of small organs in the axis, and the differential microscope is used to record the movement of small organs in the axis. Anterograde and retrograde sex are observed. 0.02% The ATP flows and stops. Three kinds of axons of fresh materials after treatment with ATP were frozen rapidly, and the treatment was observed by electron microscope. The presence of soluble protein in fresh material was observed as a cell skeleton element with difficulty in detection of protein, protein and ATP treatment groups. In the case of micro-tubes and micro-tubes, there is a gap between them. The central part of the shaft is divided into two parts: the first part is divided into two parts: the second part is divided into two parts: the first part is divided into three parts: the first part is divided into four parts: the second part is divided into four parts: the first part is divided into four parts: the first part is divided into four parts: the second part is divided into four parts: the third part is divided into four parts: the fourth part is divided into four parts; the fourth part is divided into four parts: the fourth part is divided into four parts; the fourth part is divided into four parts: the fourth part is Microtube-related chemical composition analysis, microtube-related protein analysis, micro The heat treatment resistance, low angle evaporation method, about 104nm long rod-shaped protein, and the overlap between the two methods are shown. Anti-MAP2 antibody and anti-MAP2 antibody were used to detect the 270K protein in microtubules. The possibility that the membrane small organ and the micro-tube are separated by 25nm is very strong.