種特異的DNAプローブを用いた新たな寄生虫症診断法の確立

利用物种特异性DNA探针建立新的寄生虫病诊断方法

• 批准号: 62480148
• 负责人: 田中 寛
• 金额: $ 3.52万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 1988
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-62480148/
• 关键词: DNA; 診断; 寄生虫疾患; ニューモシスチス; カリニー; フィラリア; マレー糸状虫; DNA診断

研究2年目にあたる昭和63年度の研究では、ニューモシスチス・カリニーの5SリボソームRNA配列より、カリニーは原生動物とはやや離れ、真菌に近縁であることが明らかになった。分子生物学導入により初めて明確にし得た成果と考えられる。(1)ニューモシスチス・カリニーのDNA診断培養が不可能なカリニーは、ヌードラットに感染させ増殖する以外に、十分量の材料を確保することができない。出発材料の純度が実験の成否を規定するであろうと予想した。そこで、気管支肺洗浄法と遠心分離、ヌクレオメンブラン濾過法を組合わせることにより、カリニー栄養体を可及的に純粋に精製する方法を開発した。本方法で調製したカリニーを材料にすることで、ラットDNAの混入が10%程度の比較的純度の高いカリニーDNAが調製できた。これより、EMBL3、ラムダファージの系で遺伝子ライブラリーを作製し、ラットDNAとは反応せず、カリニーDNAとのみ反応するクローンをクリーニングした。3万クローンから最も強いシグナルを与えるものを4種選んだ。いづれも、カリニーのDNAに由来することが確認され、また、互いにハイブリダイズすることなどから、リピート配列と推測された。DNA配列決定など、さらに詳細に検討中である。(2)マレー糸状虫の診断を目的としたリコンビナント抗原の作製ラムダファージ(λgt11)を用いて遺伝子ライブラリーを作製し、発現タンパクの有無を検討した。モノクロンーナル抗体と、ポリクローナル抗体を用いたスクリーニングを繰り返したが、反応陽性のクローンは検出されなかった。得られたマレー糸状虫のDNAフラグメントは種々の利用方法が考えられるので、保存し今後の研究の貴重な材料としたい。

Study 2 years に あ た る showa 63 annual の で は, ニ ュ ー モ シ ス チ ス · カ リ ニ ー の 5 s リ ボ ソ ー ム RNA with column よ り, カ リ ニ ー は protozoa と は や や near れ, fungi に try で あ る こ と が Ming ら か に な っ た. The initial めて of the introduction of molecular biology is clear に た results と examination えられる. (1) ニ ュ ー モ シ ス チ ス · カ リ ニ ー の DNA diagnosis training が impossible な カ リ ニ ー は, ヌ ー ド ラ ッ ト に infection さ せ raised colonization す る に, ten component の material を ensure す る こ と が で き な い. The purity of the released materials is が and the quality of the laboratory is を. The regulations are するであろうと and た. そ こ で, 気 tube pulmonary method at と telecentric separation, ヌ ク レ オ メ ン ブ ラ ン filter way を combination わ せ る こ と に よ り, カ リ ニ ー tech students.their ownship を can raise body and に pure 粋 に refined す る method を open 発 し た. This method で modulation し た カ リ ニ ー を material に す る こ と で, ラ ッ ト の DNA mixed with 10% が の high purity の い comparative カ リ ニ ー DNA が modulation で き た. こ れ よ り, EMBL3, ラ ム ダ フ ァ ー ジ の is で posthumous son 伝 ラ イ ブ ラ リ ー を as し, ラ ッ ト DNA と は anti 応 せ ず, カ リ ニ ー DNA と の み anti 応 す る ク ロ ー ン を ク リ ー ニ ン グ し た. Among the four options of 30,000 ロ ロ ロ ら ら ら ら the most <s:1> strong シグナ シグナ を を and える <s:1> を を, choose んだ. い づ れ も, カ リ ニ ー の DNA に origin す る こ と が confirm さ れ, ま た, mutual い に ハ イ ブ リ ダ イ ズ す る こ と な ど か ら, リ ピ ー ト match column と speculation さ れ た. DNA coordination is determined by な, さらに details are discussed in に検 である. (2) マ レ ー si shape insect の diagnosis を purpose と し た リ コ ン ビ ナ ン ト antigen の cropping ラ ム ダ フ ァ ー ジ (lambda gt11) を い て posthumous son 伝 ラ イ ブ ラ リ ー を as し, 発 now タ ン パ ク の presence of を beg し 検 た. モ ノ ク ロ ン ー ナ と ル antibody, ポ リ ク ロ ー ナ を ル antibody with い た ス ク リ ー ニ ン グ を Qiao り return し た が positive and reverse 応 の ク ロ ー ン は 検 out さ れ な か っ た. Have ら れ た マ レ ー si shape insect の DNA フ ラ グ メ ン ト は kind 々 の method using が exam え ら れ る の で, save し の research の な precious material in the future と し た い.

项目成果

Jun-ichi,Watanabe,et al: Mol Biochem.Parasitol.32. 163-168 (1989)

Jun-ichi，Watanabe，等人：Mol Biochem.Parasitol.32。

Jun-ichi,Watanabe,et al: Japan.J.Exp.Med.57. 295-297 (1987)

Jun-ichi，Watanabe 等：Japan.J.Exp.Med.57。