权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

絶対共生細菌の生産する耐熱性β-チロシナ-ゼ遺伝子のクロ-ン化と共生機構の解明

专性共生菌产生的耐热β-酪氨酸酶基因的克隆及共生机制的阐明

基本信息

批准号：
63470113
负责人：
別府輝彦
金额：
$ 4.42万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至 1989
项目状态：
已结题

项目摘要

好熱性共生細菌Symbiobacterium thermophilumの生産する耐熱性β-チロシナ-ゼ(Tyase)酵素蛋白の精製法の確立、Tyase蛋白のCNBr化学分解後にHPLCで分取した2ペプチドの部分アミノ酸配列の決定により、本Tyaseは我々が以前クロ-ン化、塩基配列決定したトリプトファナ-ゼと非常に相同性が高いことが明らかになった。従って、TPaseをプロ-ブとしてTyaseのクロ-ン化を試みたが、取得したものはTyaseでなく、本菌の有する第2のTPaseであることが判明した。なお、このTPaseについては塩基配列の決定および大腸菌での大量発現に成功した。しかしその後、TPaseをプロ-ブとして弱くハイブリダイズするDNA断片を取得し、そのC末端付近の塩基配列決定を行ったところ、TPaseと約50%という高い相同性を保持していて、これがTyaseであると推定している。この遺伝子の全長を取得すべく、サザンハイブリダイゼ-ションを行い、約4.3kb断片をクロ-ン化して、現在この全塩基配列の決定および大腸菌での大量発現させた蛋白のアッセイによるβ-チロシナ-ゼとしての確認を続行中である。一方、S.thermophilumと新種のBacillus属の一菌株との共生機構の解明については、その後共生因子の検定菌であるS.thermophilumのBacillus菌よりの分離法の改良など種々の検討を加え、Bacillusの菌体破砕上清画分に何らかの共生因子が存在することが示唆された。現在、共生因子の精製、その同定を行なうと共に、S.thermophilumが純粋培養可能となった後に、その分類上の位置、性質等を調べるつもりでいる。

Establishment of purification method of heat resistant β-glucuronidase enzyme protein for production of thermophilic symbiotic bacteria Symbibacterium thermophilum, HPLC separation of Tyase protein after CNBr chemical decomposition, determination of partial acid alignment of Tyase protein, determination of acid alignment of Tyase protein, determination TPase is the second type of enzyme that can be detected. The successful occurrence of large numbers of E. coli in the determination of the base alignment of TPase. DNA fragments were obtained and the alignment of DNA fragments near the C-terminal region was determined. The identity of DNA fragments was maintained at about 50%. The full length of the protein was obtained, and the protein fragment was transformed into a 4.3 kb fragment. The determination of the full nucleotide sequence and the identification of the large amount of protein in Escherichia coli were also carried out. A new strain of Bacillus, S.thermophilum, and its symbiotic mechanism were studied. The symbiotic mechanism of S.thermophilum and Bacillus strains was analyzed. The symbiotic mechanism of S.thermophilum and Bacillus strains was analyzed. Now, symbiotic factor refinement, identity, pure culture possibility, classification, location, nature, etc.