新しいG_1,G_2期特異的細胞周期阻害剤の探索とそれを用いた増殖制御機構の解析

寻找新的G_1、G_2期特异性细胞周期抑制剂并分析其增殖控制机制

• 批准号: 02262210
• 负责人: 別府 輝彦
• 金额: $ 7.68万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02262210/
• 关键词: Cell cycle control; Trichostatin; Leptomycin; Staurosporine; Histone acetylation; Protein kinase; Flow cytometry

1)トリコスタチンA(TSA)の標的分子の解明:TSAは動物細胞の細胞周期をG_1,G_2両期で停止させ、G_2停止細胞からの除去により増殖性4倍体細胞を形成させるなど、実質的に初めて明らかとなったG_1,G_2期特異的阻害剤である。TSAの生物活性は、その光学異性体には全く認められなかったことから、細胞内にTSAと立体特異的に結合する標的分子が存在することが示唆された。そこでこれらを明らかにする目的で増殖制御に関わる生化学反応について解析したところ、細胞内ヒストンの高アセチル化を誘導することが明らかになり、 ^3Hー酢酸のパルスチエイス実験からこれがヒストンの脱アセチル化の阻害によることが示された。そこで部分精製したヒストンデアセチラ-ゼの活性について調べてみると、非拮抗型の阻害を示し、阻害定数34nMという強力な阻害活性が明らかとなった。さらにFM3A細胞のTSA耐性変異株を取得し、そのヒストンデアセチラ-ゼ活性を測定したところ、TSA耐性を示したことからTSAの一次標的分子が本酵素であることが証明された。2)新しい細胞周期阻害剤の探索系の確立とスタウロスポリンの再発見:新しい阻害剤を取得する系としてラット3Y1細胞のS期同調培養に薬剤を加え、その停止パタ-ンをフロ-サイトメトリ-で判定するという系を確立し、約5000株の微生物培養液についてテストしたところ、低濃度でG_1停止、高濃度でG_2停止を示すものを見出した。この物質は単離構造解析の末、強力なプロテインキナ-ゼの阻害剤として知られるスタウロスポリンであった。本物質によるG_2停止は可逆的であり、薬剤除去後同調的なG_2→Mの進行が認められ、G_2期からの同調培養が初めて可能になった。この場合の標的キナ-ゼは<cdc2>___ーキナ-ゼまたはCーキナ-ゼが考えれるが、現在その同定を急いでいる。

1) The molecular target of TSA was clarified:TSA was A specific inhibitor of cell cycle arrest and cell cycle arrest in G_1, G_2 phases of animal cells. The biological activity of TSA is demonstrated by the presence of stereospecific target molecules in cells. For this purpose, the biochemical reactions involved in the production and control of proteins are analyzed, and the intracellular reactions are induced. In addition, some of the products were refined, and the activity was regulated. The non-antagonistic resistance value was 34nM, and the strong resistance activity was increased. The TSA tolerance of FM3A cells was determined by enzyme activity assay and TSA tolerance assay. 2)A new system for cell cycle inhibitors was developed. The new system for cell cycle inhibitors was established in culture medium of about 5000 strains of microorganisms. G_1 stopped at low concentration and G_2 stopped at high concentration. The material is separated from the structural analysis of the end, the strength of the resistance to change, the strength of the resistance to change. This substance stops reversibility of G_2 phase, and after removal of G_2 phase, the homology of G_2→M phase proceeds to recognition, and the homology of G_2 phase begins to develop. The subject of this case is<cdc2>-_-C-

项目成果

M.Yoshida <et>___ー <al.>___ー: "Structural specificity for biological activity of trichostatin A,a specific inhibitor of mammalian cell cycle with potent differentiationーinducing activity in Friend leukemia cells" The Journal of Antibiotics. 43. 1101-1106

M. Yoshida <et>____ <al.>____：“曲古抑菌素 A 的生物活性的结构特异性，曲古抑菌素 A 是一种哺乳动物细胞周期的特异性抑制剂，在 Friend 白血病细胞中具有有效的分化诱导活性”《抗生素杂志》。 43.1101-1106

M.Yoshida <et>___ー <al.>___ー: "Effects of leptomycin B on the cell cycle of fibroblasts and fission yeast cells" Experimental Cell Research. 187. 150-156 (1990)

M. Yoshida <et>___ー <al.>____：“瘦霉素 B 对成纤维细胞和裂殖酵母细胞的细胞周期的影响”实验细胞研究 187. 150-156 (1990)。

M.Yoshida <et>___ー <al.>___ー: "Potent and specific inhibition of mammalian histone deacetylase both <in>___ー <vivo>___ー and <in>___ー <vitro>___ー by trichostatin A" The Journal of Biological Chemistry. 265. 17174-17179 (1990)

M. Yoshida <et>___ー <al.>___ー：“对哺乳动物组蛋白脱乙酰酶具有有效且特异性的抑制作用，<in>____ <vivo>____ 和 <in>____ <vitro>__ _ー 作者：曲古抑菌素 A”《生物化学杂志》。265. 17174-17179 (1990)

K.Abe <et>___ー <al.>___ー: "Highly synchronous culture of fibroblasts from G2 block caused by staurosporine,a potent inhibitor of protein kinases" Experimental Cell Research. 192. 122-127 (1990)

K.Abe <et>___ー <al.>___ー：“由星形孢菌素（一种有效的蛋白激酶抑制剂）引起的 G2 阻滞的成纤维细胞的高度同步培养”实验细胞研究。 192. 122-127 (1990)