新しいG1,G2期特異的細胞周期阻害剤の探索とそれを用いた増殖制御機構の解析

寻找新的G1和G2期特异性细胞周期抑制剂并分析其增殖控制机制

• 批准号: 03258209
• 负责人: 別府 輝彦
• 金额: $ 7.68万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03258209/
• 关键词: プロテインキナ-ゼ; 多倍体; 細胞周期; レプトマイシン; P‐糖蛋白質; 多剤耐性遺伝子; ラディシコ-ル; チロシンキナ-ゼ

我々は細胞周期の基本的な制御が行われ,多くの細胞性癌遺伝子が機能していると考えられるG1,G2期に作用する薬剤を探索し、その化学療法として可能性を探ると同時にそれら特異的阻害剤を複雑な細胞周期制御のネットワ-クを解明するための道具として利用していこうと考えている。本年度は以下の3点の成果が挙がった。1)プロテインキナ-ゼ阻害剤K‐252aによる細胞の多倍数化:広範な探索からプロテインキナ-ゼ阻害剤K‐252aが調べた限り全ての細胞系に対してそのDNA含量を多倍数化させることをフロ-サイトメトリ-を用いて明らかにした。各種同調培養と代謝阻害剤の共存実験から,K‐252aの存在下ではG2期から速やかにG1期への移行が起こり,分裂を経ないまま次のS期へ進行することがわかった。この時P13^<suc1>に結合するヒストンH1キナ-ゼ活性は,M期での強力な活性化が認められず,S期での弱い活性化が周期的に観察された。K‐252a処理によって多倍化した細胞は巨大な単核細胞となり,48時間以内に最大32Cをもつ細胞が蓄積した。2)レプトマイシン耐性遺伝子の解析:分裂酵母のレプトマイシン耐性遺伝子をクロ-ン化したところ,ヒトMDR1と高いホモロジ-を示す遺伝子pmd1^+を得た。本遺伝子をマルチコピ-で導入した野生型分裂酵母は多剤耐性を示したことから,本遺伝子は下等真核生物で始めて同定された機能的なP‐糖蛋白質ホモログであると考えられる。3)新しい細胞周期阻害剤の探索:カビの一種が生産するG1,G2期特異的阻害剤を精製し,構造解析した結果,以前抗カビ剤として報告のあったラディシコ-ルであると同定した。本物質の作用機構を詳細に解析した結果,特異的なチロシンキナ-ゼ阻害剤であることが明らかになった。今後有用な生化学試薬になると考えられる。

I do basic control of the cell cycle, control the function of the multi-cellular carcinoma, and explore the effects of G1 and G2 phases, chemotherapy. It is possible to detect and control the cell cycle at the same time.ネットワ-クを Explain the use of するための props and として していこうと考えている. This year’s achievements include the following three points. 1) Polymerization of プロテインキナ-ゼblocker K-252a による cells: Hiromon Exploration からプロテインキナ-ゼblocker K-252 aがadjustedべたlimitedり全てのcell lineに対してそのDNA contentをmultiple化させることをフロ-サイトメトリ-を用いて明らかにした. The coexistence of various homologous cultures and metabolic inhibitors can speed up the G2 phase in the presence of K-252a.かにG1 phase へのshift が出こり, split を経ないまま时のS phase へ progress することがわかった.この时P13^<suc1>に合するヒストンH1キナ-ゼactiveは,M periodでのStrong なactivationがcognizeめられず, S phase でのweak いactivation がcyclic に観看された. K-252a treatment can produce polyploidized cells and giant single-nuclear cells, and can accumulate maximum 32C cells within 48 hours. 2) Analysis of the resistance of fission yeast: The tolerance of fission yeast -ン化したところ,ヒトMDR1と高いホモロジ-をshowす缝子pmd1^+を得た. The original をマルチコピ-で introduced into the wild-type fission yeast は multi-tolerance を showed したことから, the original 伝It is a P-glycoprotein that has the same function as the lower eukaryotes. 3) Exploration of new cell cycle inhibitors: カビのproduces G1 and G2 phase-specific inhibitors.し, structural analysis results, previously reported by カビとしてのあったラディシコ-ルであると同定した. The mechanism of action of this substance has been analyzed in detail, and the results show that it has a specific inhibitory effect. In the future, the biochemistry test will be useful.

项目成果

H. J. Kwon: "Radicicol,an agent inducing the reversal of transformed phenotypes of src‐transformed fibroblasts." Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry.

H. J. Kwon：“Radicicol，一种诱导 src 转化的成纤维细胞转化表型逆转的药物。”

K. Nishi: "A leptomycin B resistance gene of Schizosaccharomyces pombe encodes a protein similar to the mammalian P‐glycoproteins." Molecular Microbiology.

K. Nishi：“粟酒裂殖酵母的瘦霉素 B 抗性基因编码与哺乳动物 P-糖蛋白类似的蛋白质。”

K.Abe: "Highly synchronous culture of fibroblasts from G2 block caused by staurosporine,a potent inhibitor of protein kinases." Experimental Cell Research. 192. 122-127 (1991)

K.Abe：“星形孢菌素（一种有效的蛋白激酶抑制剂）引起的 G2 阻滞成纤维细胞的高度同步培养。”

Y. Hoshikawa: "Expression of differentiation‐related markers in teratocarcinoma cells via histone hyperacetylation by trichostatin A." Agricultural and Biological Chemistry. 55. 1491-1495 (1991)

Y. Hoshikawa：“通过曲古抑菌素 A 进行组蛋白过度乙酰化，在畸胎癌细胞中表达分化相关标记。” 农业和生物化学 55. 1491-1495 (1991)

T. Usui: "Uncoupled cell cycle without mitosis induced by a protein kinase inhibitor K‐252a" The Journal of Cell Biology. 115. 1275-1282 (1991)

T. Usui：“蛋白激酶抑制剂 K-252a 诱导的无有丝分裂的解偶联细胞周期”《细胞生物学杂志》115. 1275-1282 (1991)。