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植物ホスホリラ-ゼアイソザイムの器官特異的発現の調節

植物磷酸化酶同工酶器官特异性表达的调节

基本信息

批准号：
63470109
负责人：
福井俊郎
金额：
$ 3.26万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至 1989
项目状态：
已结题

项目摘要

植物組織中には細胞内分布と構造の異なる2種のホスホリラ-ゼアイソザイムが存在するが、器官によってそれらの存在比が大きく異なると共に、基質グルカンに対する親和性にも大きな差異が存在する。デンプン代謝におけるこれら2種のアイソザイムの役割を分子生物学的アプロ-チにより解明することを目的とするものである。1.細胞質型アイソザイムを精製し、トリプシン分解により断片化した。生じたポリペプチドを分離し、いくつから部分アミノ酸配列を決定した。これら部分配列よりデザインしたオリゴヌクレオチドをプロ-ブとして、得られたクロ-ンは838アミノ酸から成るポリペプチル鎖をコ-ドしていた。アミノ末端はアセチル化されていた。2.ジャガイモ塊茎の両アイソザイム間には、63%の相同性がみられ、活性部位周辺の配列は完全に保存されていた。しかしながら、それらの一次構造上には、アミロプラスト型アイソザイムのみがアミノ末端側延長配列と中央部にある78残基の挿入配列が存在するという、明らかな相達が見いだされた。3.種々のサイズの塊茎から単離したRNAに対して、それぞれのアイソザイムに特異的なcDNAプロ-ブを用いて、Northern Blot分析を行なった。両アイソザイムに対するcDNAプロ-ブは、いずれの成熟時期においても、常に存在しており、それらの長さや量には、2つのアイソザイム間において顕著な差は見られなかった。4.Dot blottingによると、アミロプラスト型アイソザイムをコ-トするmRNAは、細胞質型アイソザイムをコ-ドするmRNAの約50倍含まれていた。両ホスホリラ-ゼアイソザイムの含有量は、転写段階で調節されているものと考えられる。

In plant tissues, there are two kinds of differences in intracellular distribution and structure, and there are two kinds of differences in affinity between plant tissues and organs. Two kinds of metabolic enzymes are involved in molecular biology. 1. The cytoplasmic interface is refined and fragmented during the decomposition of trellises. The acid sequence is determined by the separation of the two components. This part of the arrangement is called "the first step" and "the second step". The end of the game is lost. 2. 63% of the identity of the active site was completely preserved. In the first order of the structure, there is an extension of the terminal side and an insertion of 78 residues in the central part. 3. For isolated RNA from the tubers of the plant, cDNA pro-enzymes specific to the prepared tubers were used and Northern Blot analysis was performed. The cDNA sequence of this gene is very similar to that of the cDNA sequence of this gene. The cDNA sequence of this gene is very similar to that of this gene. 4. Dot blotting is about 50-fold more abundant in mRNA for cytoplasmatic type of protein. The content of the oil in the oil is adjusted to the level of the oil in the oil in the oil.