ニジマスインタ-フェロン遺伝子の特性と活性及びその応用

虹鳟鱼干扰素基因的特性、活性及其应用

基本信息

  • 批准号:
    03806028
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.83万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1991
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1991 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

昨年度,ニジマス肝蔵より常法に従ってDNAを抽出し、XbaI断片約25KbのDNAをcharomid9ー28をベクタ-として、geromic DNA部分ライブラリ-を作製した。このライブラリ-より、大阪大学、谷口維紹教授より分与を受けたヒトインタ-フェロンβのcDNAをプロ-ブとして陽性シグナルを示すコロニ-を釣り上げた。ところが、この陽性シグナルを示したcharomid(RTINFβー1)からインサ-トXbaI断片を切り出し、種々の制限酵素で切断して後、ヒトインタ-フェロンBcDNAをプロ-ブとしてハイブリダイゼイションを行ったところ、プロ-ブDNAと相同性を示すバンドは検出できなかった。原因としてクロ-ニングのために使用したプロ-ブへのベクタ-pBR322の混入を疑い、精製度を高めたヒトインタ-フェロンβのプロ-ブと前に用いたものを用いて、RTINFβー1のインサ-ト及びベクタ-XbaI断片をサザンハイブリダイゼ-ションした。その結果、釣り出しに用いたプロ-ブにはわずかなPBR322断片の混入があり、これがCharomid9ー28とハイブリしたため、陽性シグナルを形成したことが明らかになった。また昨年度、ハイブリゼイションの最適条件として選んだ、4×SSC,60℃オ-バ-ナイトハイブリダイゼ-ション、3×SSC,55℃、30分の洗浄条件では、為陽性シグナルを拾う確率が高いこともわかり、6×SSC,65℃,オ-バ-ナイトハイブリダイゼ-ション、15×SSC,65℃、15℃の洗浄条件の方がよいことも明らかになった。現在、再度、ニジマスのgenomic DNAライブラリ-を作製し、新たに調製したプロ-ブを用いて陽性シグナル(RTINFPー2)の釣り対しに成功したので、制限酵素地図の作製を試み、釣り出したgeneの解析を急いでいる。
Last year, the DNA fragment of XbaI was extracted from the liver by normal method, and the DNA fragment of XbaI was about 25Kb. Osaka University, Professor Taniguchi Taniguchi The positive gene charomid(RTINFβ 1) is shown in the following table. After the restriction enzyme is cut off, the DNA fragment is cut off and the DNA identity is shown in the table. The reason for this is that the use of RTINF β 1 and RTINF β 1 in the use of RTINF β 1 in the use of RTINF β 1 and RTINFβ 1 in the use of RTINFβ 1. PBR322 Fragment of the fish, fish, fish In the past year, the optimum conditions for the preparation of the mixed solution were selected as follows: 4×SSC,60℃, 3×SSC,55℃, 30 min, 6×SSC, 65 ℃, 15×SSC, 65 ℃, 15℃. Now, once again, the genomic DNA sequence is controlled, the new modulation is used, the positive sequence (RTINFP) is successfully detected, the enzyme sequence is controlled, and the gene analysis is urgently carried out.

项目成果

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会议论文数量(0)
专利数量(0)

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