細胞核に存在する新しいイノシト-ルリン脂質特異的ホスホリパ-ゼCの構造と機能

细胞核中存在的新型肌醇磷脂特异性磷脂酶 C 的结构和功能

• 批准号: 03808017
• 负责人: 小泉 惠子
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03808017/
• 关键词: ホスホリパ-ゼC; イノシト-ルリン脂質; 細胞核; ホスファチジルイノシト-ルモノリン酸; ホスファチジルイノシト-ル; 再生肝

我々により初めて細胞核に見い出されたイノシト-ルリン脂質特異的ホスホリパ-ゼC(PLC)の構造ならびに機能の解明を目的として実験を進め,以下の結果を得た。1.細胞核PLCの精製:ラット腹水肝癌細胞(AH7974)より分離精製した核からPLCを可溶化し,4種類のカラムクロマトグラフィ-およびグリセロ-ル密度勾配超遠心を行って高度に精製された4種類のPLCを得た。4種とも既知のPLCr_1,r_2およびδのいづれの抗体とも反応せず,一時的にPLCーA,ーB,ーC,ーDと名づけた。成熟静止肝ならびに再生肝(S期)の核からもPLCを精製し,静止肝からはPLCーAとCが,再生肝からはAH7974細胞と同様PLCーA,ーB,ーCおよびーDが得られた。2.細胞質上清および細胞膜PLCの精製:AH7974細胞より細胞質上清および細胞膜画分を調製し,それぞれからPLCを精製した。両画分とも主としてPLCーAおよびーCが同定された。3.4種類のPLCの性質の比較:(1)すべてのPLCがその活性発現のためにCa^<2+>を要求した。また,すべてのPLCがホスファチジルイノシト-ルモノリン酸(PIP)ならびにジリン酸(PIP_2)の加水分解はμMオ-ダ-のCa^<2+>の存在下で効率よく行ったが,ホスファチジルイノシト-ル(PI)の加水分解には,PLCーA,ーB,ーCはmMオ-ダ-のCa^<2+>を要求し,一方,PLCーDのみμMオ-ダ-のCa^<2+>でPIを加水分解した。(2)PLCーAおよびーCはPIを最もよく加水分解し,一方,PLCーBおよびーDはPIPを最も効率よく加水分解した。(3)PLCーAおよびーCに比し,ーBおよびーDは効率よくDNAに結合した。以上の結果から,PIPを最も効率よく加水分解し,DNAと結合するという特徴をもつPLCーBおよびーDは核に多く存在し,しかも増殖期細胞核に特異的なPLCであることが判明した。これらPLCの抗体の作製およびcDNAのクロ-ニングを目指して現在実験を進めている。

The structure and function of the cell nucleus were studied. The following results were obtained 1. Cell nuclear PLC purification: ascites liver cancer cells (AH7974) isolation purification of nuclear PLC solubilization, 4 kinds of high-density matching ultra-remote processing of PLC purification. 4 kinds of known PLCr_1, r_2 and δ antibodies were detected, and the temporary PLC A, B, C, D were detected. The mature resting liver and the regenerating liver (S phase) are purified by PLC, the resting liver is purified by PLC A and C, and the regenerating liver is purified by AH7974 cells. 2. Purification of cytoplasmic supernatant and cell membrane PLC: AH7974 cells were prepared by mixing cytoplasmic supernatant and cell membrane PLC. A: The two sides of the border are facing each other. 3.4 The comparison of the properties of PLC:(1) The activity of PLC is required by Ca^<2+>. Also, the hydrolysis of PLC's (PIP) and (PIP_2) is efficient in the presence of μM-Ca^<2+>. For the hydrolysis of-(PI), PLC A, B, and C require mM--Ca^<2+>. On the one hand,PLC D's μM-Ca^<2 +> PI is hydrolyzed. (2)PLC A and C are the most suitable for hydration, and PLC B and D are the most suitable for hydration. (3)PLC A and C are closely related to each other. The above results show that PIP has the highest efficiency, hydrolysis and DNA binding characteristics, and PLC B and D nuclei exist in many cases, and specific PLC in reproductive cells is identified. The antibody production and cDNA translation of PLC are now in progress.

项目成果

Hiroshi Kuriki: "Existence of phosphoinositideーspecific phospholipase C in rat liver nuclei and its change during liver regeneration" J.Biochem.111. 283-286 (1992)

Hiroshi Kuriki：“大鼠肝细胞核中磷酸肌醇特异性磷脂酶 C 的存在及其在肝再生过程中的变化”J.Biochem.111 283-286 (1992)。

Hiroo Ishihara: "Growthーassociated changes in tatty acid compositions of muclear phospholipids of liver cells." Biochim.Biophys.Acta. 1084. 53-59 (1991)

Hiroo Ishihara：“肝细胞核磷脂脂肪酸组成的生长相关变化。Biochim.Biophys.Acta。”1084. 53-59 (1991)

Masahiko Asano: "Purification and characterization of four forms of phosphoinositidesーspecific phospholipase c from nuclei of rat ascites hepatoma cells"

Masahiko Asano：“从大鼠腹水肝癌细胞核中纯化和表征四种形式的磷酸肌醇特异性磷脂酶 c”