肝小胞体膜の形成機構の研究

肝内质网膜形成机制的研究

• 批准号: 03833024
• 负责人: 三原 勝芳
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03833024/
• 关键词: シグナル; アンカ-; ER; 膜蛋白質

(1)シグナル/アンカ-の系統的解析我々はPー450分子のN末端に存在するシグナル/アンカ-の機能がN末端の荷電アミノ酸の数と疎水領域の長さとのバランスによって決定されることを推定していたが、今回N末端の荷電アミノ酸の数と疎水領域の長さとを系統的に変えた人工的シグナル/アンカ-を持つ蛋白質を18種類構築しERへの挿入様式をin vitroで解析し、この仮説を実証することに成功した。(2)膜透過停止配列(ST)の系統的解析ER膜を通過する蛋白質の分子内に疎水性アミノ酸に富む領域が存在すると膜透過はその部分で停止し蛋白分子は膜にアンカ-される。今回はロイシン、ロイシン/アラニン、アラニンより構成されるいろいろな長さのクラスタ-を分泌蛋白質分子の中に挿入したこれらの分子のER膜透過の様子を解析することによりST機能に必要な条件を検討した。ロイシンでは9残基の、またアラニンでは19残基クラスタ-で完全な停止が見られた。またSTのC末端側に塩基性アミノ酸が存在するとST機能が増強されることも分かった。(3)カルボキシエステラ-ゼの細胞内局在従来カルボキシエステラ-ゼはすべてER内腔にのみ局在するものと考えられていたが、我々がラット肝より単離したcDNAがコ-ドするカルボキシエステラ-ゼのC末端にはER局在化のコンセンサス配列が見られなかった。このcDNAをCOS細胞に導入し、発現した蛋白質の細胞内局在を検討したところ、極めて速やかに細胞外へ分泌され、且つ複合型の糖修飾を受けていることが分かった。一方、分泌型カルボキシエステラ-ゼのC末端部分を別のタイプのエステラ-ゼのC末端部で置換したものはERにとどまっていた。さらにラット血清中にかなりの量の複合糖型カルボキシエステラ-ゼが存在することを見いだした。

(1)The analysis of the system of P-450 molecule shows that the function of P-450 molecule in the N-terminal region is determined by the number of charged acids in the N-terminal region and the length of the water domain. The number of N-terminal charged acids and the length of the water domain were analyzed in vitro and proved successfully. (2)Analysis of Membrane Permeability Stop Alignment (ST) System ER Membrane Permeability Stop Allocation (ST) This paper discusses the necessary conditions for the analysis of ER membrane permeability of these molecules. 9 residues, 19 residues, 19 residues The C-terminal side of ST has a basic amino acid, so ST functions are enhanced. (3)The cell site of the ER is located in the middle of the ER lumen, and the cDNA site of the ER lumen is located in the middle of the ER lumen. This cDNA is introduced into COS cells, and proteins are expressed in intracellular processes, secreted at high speeds, and modified by complex carbohydrates. A side, secreting type, C terminal part, different type, C terminal part, different type, different type The amount of complex glycoforms in the serum of the patient was determined.

项目成果

Tomoko Kuroiwa: "Systematic Analysis of StopーTransfer Sequence for Microsomal Membrane" J.Biological Chemistry. 266. 9251-9255 (1991)

Tomoko Kuroiwa：“微粒体膜停止转移序列的系统分析”J.Biological Chemistry 266. 9251-9255 (1991)

Masao Sakaguchi: "Functions of signal and signalーanchor sequences are determined by the balance between the hydrophobic segment and the Nーterminal charge" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 89. 16-19 (1992)

Masao Sakaguchi：“信号和信号锚序列的功能由疏水片段和 N 末端电荷之间的平衡决定”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89. 16-19 (1992)。