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ミトコンドリア前駆体アンフォルダーゼの研究

线粒体前体解折叠酶的研究

基本信息

批准号：
05268231
负责人：
三原勝芳
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05268231/
关键词：
シャロペンミトコンドリアシグナル配列

项目摘要

前駆体蛋白質のミトコンドリア輸送の過程で細胞質に於て機能するMSFの構造、機能ならびに作用機序をinvitro及びin vivoにおいて明らかにすることを目的として本研究を行なっている。本年度の補助金によって次の事柄を明らかにした。(1)MSFのcDNAクローニング精製したMSFの大小サブユニット(MSF_L、MSF_S)の部分アミノ酸配列をもとにPCR法によって両サブユニットのcDNAクローンを分離し、それらの製造決定を行なった。MSF_L、MSF_Sともに、14-3-3と命名された蛋白質ファミリー属している。大腸菌内で過剰発現したのちに精製した両サブユニットはミトコンドリア前駆体を認識しそのミトコンドリアへの輸送を促進した。但しラット肝より精製したMSFよりも活性は弱く、ATPase活性も示さなかった。真核細胞内での翻訳後修飾が必要と思われる(投稿準備中)。(2)MSFのペプチド認識の特異性MSFはミトコンドリア標的化配列に対する合成ペプチドに依存して高いATPase活性を出すことを見いだした。この活性を指標にして様々な合成ペプチドを検討した結果、ミトコンドリア標的化配列に対して極めて高い特異性を持つことが明らかになった。その認識には標的化配列に含まれる塩基性アミノ酸が重要であった。ミトコンドリア標的化配列がMSFに結合すること、ATPの加水分解によってその配列がMSFから遊離することを示した(投稿準備中)。(3)MSFとミトコンドリア前駆体蛋白質との相互作用精製した基質量の前駆体蛋白質を用いて解析を行ない、MSFが、ほどけた構造の前駆体と結合してそれを安定化すること、ATPの加水分解によってその前駆体を遊離すること、ミトコンドリアに輸送されることが出来ない凝集した状態の前駆体を認識しATP依存的にそれらを解きほぐす活性を持つことを明らかにした(投稿準備中)。

The structure, function and mechanism of action of MSF in cytoplasm and in vivo are the main reasons why this study was carried out. This year's grant was awarded to the public. (1) The cDNA of MSF was purified by PCR, and the size of MSF (MSF_L, MSF_S) was determined by PCR. MSF_L, MSF_S, 14-3-3 and 14- 4 are named after the protein. The development of Escherichia coli and the improvement of its transportation However, MSF activity was weak and ATPase activity was weak. Eukaryotic post-translational modification is necessary (submission preparation) (2) The specificity of MSF in the recognition of MSF is related to the synthesis of MSF and the dependence of MSF on ATPase activity. The activity index is composed of the following components: It is important to understand the chemical composition of the target. For example, the combination of ATP with MSF and the combination of ATP with MSF are shown (in preparation for submission). (3) The interaction between MSF and precursor proteins, purification of precursor proteins of basic mass, analysis of precursor proteins of MSF structure, binding of precursor proteins of structure, stabilization of precursor proteins, hydrolysis of ATP, dissociation of precursor proteins of structure, and purification of precursor proteins of structure. In preparation for submission, the precursor to the aggregation state is recognized as ATP-dependent.