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ミトコンドリア前駆体アンフォルダーゼの研究

线粒体前体解折叠酶的研究

基本信息

批准号：
05268231
负责人：
三原勝芳
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05268231/
关键词：
シャロペンミトコンドリアシグナル配列

项目摘要

前駆体蛋白質のミトコンドリア輸送の過程で細胞質に於て機能するMSFの構造、機能ならびに作用機序をinvitro及びin vivoにおいて明らかにすることを目的として本研究を行なっている。本年度の補助金によって次の事柄を明らかにした。(1)MSFのcDNAクローニング精製したMSFの大小サブユニット(MSF_L、MSF_S)の部分アミノ酸配列をもとにPCR法によって両サブユニットのcDNAクローンを分離し、それらの製造決定を行なった。MSF_L、MSF_Sともに、14-3-3と命名された蛋白質ファミリー属している。大腸菌内で過剰発現したのちに精製した両サブユニットはミトコンドリア前駆体を認識しそのミトコンドリアへの輸送を促進した。但しラット肝より精製したMSFよりも活性は弱く、ATPase活性も示さなかった。真核細胞内での翻訳後修飾が必要と思われる(投稿準備中)。(2)MSFのペプチド認識の特異性MSFはミトコンドリア標的化配列に対する合成ペプチドに依存して高いATPase活性を出すことを見いだした。この活性を指標にして様々な合成ペプチドを検討した結果、ミトコンドリア標的化配列に対して極めて高い特異性を持つことが明らかになった。その認識には標的化配列に含まれる塩基性アミノ酸が重要であった。ミトコンドリア標的化配列がMSFに結合すること、ATPの加水分解によってその配列がMSFから遊離することを示した(投稿準備中)。(3)MSFとミトコンドリア前駆体蛋白質との相互作用精製した基質量の前駆体蛋白質を用いて解析を行ない、MSFが、ほどけた構造の前駆体と結合してそれを安定化すること、ATPの加水分解によってその前駆体を遊離すること、ミトコンドリアに輸送されることが出来ない凝集した状態の前駆体を認識しATP依存的にそれらを解きほぐす活性を持つことを明らかにした(投稿準備中)。

Pre-body protein transport process, cytoplasmic function, MSF structure, function, action mechanism, invitro and in vivoにおいて明らかにすることをPurpose and purpose of this study is the conduct of this study. This year's subsidy is due to the fact that the event is clear. (1) Partial parts of MSF cDNA purified MSF size DNA (MSF_L, MSF_S)ノAcid alignment をもとにPCR method によって両サブユニッのcDNA クローンを isolation し, それらの manufacturing decision を行なった. MSF_L, MSF_Sともに, 14-3-3とnamed されたprotein ファミリーgenus している. Refined sterilized sterilized coliform bacteria in the coliformンドリア前槆体をKnowledge しそのミトコンドリアへのTransportation を Promotion した. However, the purified MSF has weak activity and ATPase activity. The necessity of post-translational modification in eukaryotic cells is considered (in preparation for submission). (2) Specificity of MSF's chemical recognition MSF's target chemical alignmentするsynthetic ペプチドにdepends on してhighいATPase activityを出すことを见いだした.このACTIVITY をINDICATOR にして様々なSYNTHESIS ペプチドを検したRESULTS、ミトコンドThe chemical composition of the target is very specific and has high specificity. It is important to know that the chemical composition of the target contains the basic amino acid. Mitsubishi's standard chemical formula is MSF, combined with ATP, and hydrolyzed by water.によってそのmatching がMSF から免费することをshow した (preparing for submission). (3)MSF is a pre-body protein interaction purification system that uses the basic quality of the pre-body protein Analysis of を行ない, MSFが, ほどけたstructureの前槆体とcombinationしてそれをstabilizationすること, ATPのadding moisture The solution is the free front body, the free transport, and the condensed state. The former body recognizes the ATP-dependent にそれらをsolved きほぐすactive をhold つことを明らかにした (preparing for submission).