ミトコンドリア前駆体アンフォルダーゼの研究

线粒体前体解折叠酶的研究

• 批准号: 05268231
• 负责人: 三原 勝芳
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05268231/
• 关键词: シャロペン; ミトコンドリア; シグナル配列

前駆体蛋白質のミトコンドリア輸送の過程で細胞質に於て機能するMSFの構造、機能ならびに作用機序をinvitro及びin vivoにおいて明らかにすることを目的として本研究を行なっている。本年度の補助金によって次の事柄を明らかにした。(1)MSFのcDNAクローニング精製したMSFの大小サブユニット(MSF_L、MSF_S)の部分アミノ酸配列をもとにPCR法によって両サブユニットのcDNAクローンを分離し、それらの製造決定を行なった。MSF_L、MSF_Sともに、14-3-3と命名された蛋白質ファミリー属している。大腸菌内で過剰発現したのちに精製した両サブユニットはミトコンドリア前駆体を認識しそのミトコンドリアへの輸送を促進した。但しラット肝より精製したMSFよりも活性は弱く、ATPase活性も示さなかった。真核細胞内での翻訳後修飾が必要と思われる(投稿準備中)。(2)MSFのペプチド認識の特異性MSFはミトコンドリア標的化配列に対する合成ペプチドに依存して高いATPase活性を出すことを見いだした。この活性を指標にして様々な合成ペプチドを検討した結果、ミトコンドリア標的化配列に対して極めて高い特異性を持つことが明らかになった。その認識には標的化配列に含まれる塩基性アミノ酸が重要であった。ミトコンドリア標的化配列がMSFに結合すること、ATPの加水分解によってその配列がMSFから遊離することを示した(投稿準備中)。(3)MSFとミトコンドリア前駆体蛋白質との相互作用精製した基質量の前駆体蛋白質を用いて解析を行ない、MSFが、ほどけた構造の前駆体と結合してそれを安定化すること、ATPの加水分解によってその前駆体を遊離すること、ミトコンドリアに輸送されることが出来ない凝集した状態の前駆体を認識しATP依存的にそれらを解きほぐす活性を持つことを明らかにした(投稿準備中)。

Before 駆 body protein の ミ ト コ ン ド リ ア conveying の process で cytoplasm に in て function す る MSF の structure, functional な ら び に function machine sequence を invitro and び in vivo に お い て Ming ら か に す る こ と を purpose と し て this research line を な っ て い る. The current year 's grant is によって times. The matters are を, ら に, に and た. (1) the MSF の cDNA ク ロ ー ニ ン グ refined し た MSF の size サ ブ ユ ニ ッ ト (MSF_L, MSF_S) の ア ミ ノ acid with column を も と に PCR method に よ っ て struck サ ブ ユ ニ ッ ト の cDNA ク ロ ー ン を separation し, そ れ ら の manufacturing line decision を な っ た. MSF_L, MSF_Sと と に に, 14-3-3と named された proteins ファ リ リ に belong to the genus て て る る る. Coliform で within a turning 発 now し た の ち に refined し た struck サ ブ ユ ニ ッ ト は ミ ト コ ン ド リ ア 駆 body before を know し そ の ミ ト コ ン ド リ ア へ の conveying を promote し た. However, the activity of <s:1> ラット liver よ <s:1> refined <s:1> たMSFよ <s:1> ラット is <s:1> weak く, and the activity of ATPase is さな さな った った. In eukaryotic cells, で <s:1> is translated into 訳 and then modified が is necessary と thought われる(submission preparation). (2) the MSF の ペ プ チ ド know の specificity MSF は ミ ト コ ン ド リ ア mark is changed with column に す seaborne る synthetic ペ プ チ ド に dependent し て high い ATPase activity を out す こ と を see い だ し た. を こ の activity index に し て others 々 な synthetic ペ プ チ ド を beg し 検 た results, ミ ト コ ン ド リ ア mark is changed with column に し seaborne て extremely め て high い specificity を holding つ こ と が Ming ら か に な っ た. Youdaoplaceholder0 そ recognize that the standardization and configuration of に に に に containing まれる basic ア ノ ノ acids が are important であった. ミ ト コ ン ド リ ア mark is changed with column が MSF に combining す る こ の と, ATP hydrolysis に よ っ て そ の match column が MSF か ら free す る こ と を shown し た (contribute to). (3) the MSF と ミ ト コ ン ド リ ア 駆 body protein before と の interaction of refined し た base quality before の を 駆 body protein with い て parsing line を な い, MSF が, ほ ど け た structure before の と 駆 body with し て そ れ を stabilization す る こ の と, ATP hydrolysis に よ っ て そ の 駆 body before を free す る こ と, ミ ト コ ン ド リ ア に conveying さ れ る こ と が out な い agglutination し た state before の 駆 body を know し ATP dependent に そ れ ら を solution き ほ ぐ す active を hold つ こ と を Ming ら か に し た (contribute to).

项目成果

Naomi Hachiya: "Mitochondrial import factor purified from rat liver cytosol is an ATP-dependent conformational modulator for precursor proteins" EMBO J.12. 1579-1586 (1993)

Naomi Hachiya：“从大鼠肝细胞质中纯化的线粒体输入因子是前体蛋白的 ATP 依赖性构象调节剂”EMBO J.12。