ゾウリムシ発生初期過程における生殖核と栄養核の核膜分化の研究

草履虫发育早期生殖细胞核和营养细胞核膜分化的研究

• 批准号: 04640662
• 负责人: 藤島 政博
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04640662/
• 关键词: ゾウリムシ; 大核分化; 核膜分化; モリクローナル抗体; 核膜

ゾウリムシの単離大核を抗原として得られた大核核膜特異的モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ(MAC‐MEN‐1)の抗原の性質について、下記のことが明かになった。1.SDS‐PAGEのイムノブロットで、70kDa、25kDa、20kDaの3本のバンドが抗原性を示した。低分子の2本はマイナーなバンドなので、分解産物の可能性がある。2.70kDaのバンドをCBB染色したSDS‐PAGEゲルからゲル断片を切り出し、1N NaOHで抗原タンパク質を抽出し、1N HC1でpHを中和して精製した。この試料をSDS‐PAGEに再びかけ、CBB染色と免疫染色した結果、70kDaの1本のバンドが現れ、精製できたことが確認できた。3.細胞抽出液をNative‐PAGEし、免疫染色すると、200kDa以上の高分子にバンドが現れることから、nativeの状態では、抗原は他の分子と結合して存在することが示唆された。4.間接蛍光抗体法で、核分化過程での抗原の出現時期を調べると、形態的に大核原基の分化が始まるとほぼ同時に抗原が大核原基核膜に出現した。無小核株の大核にも抗原が存在するので、抗原は大核遺伝子の発現でできることが分かった。5.免疫電顕で抗原の局在性の詳細を調べようとしたが、抗原性が失われて観察できなかった。精製した抗原をマウスに注射して、別のエピトープを抗原決定基とするモノクローナル取りを試みている。

The characteristics of the antigen produced by MAC-MEN-1 are described below. 1. SDS-PAGE showed the antigenicity of the three basic proteins of 70 kDa, 25 kDa and 20 kDa. The possibility of decomposition products of low molecular weight compounds is discussed. 2.70 kDa protein was extracted by CBB staining, SDS-PAGE, and purified by neutralization with 1N NaOH and 1N HC. The sample was purified by SDS PAGE, CBB staining and immunostaining, and the 70kDa protein was purified and confirmed. 3. Cell extracts are native to PAGE, immunostaining, and the presence of macromolecules larger than 200kDa. 4. Indirect light antibody method, nuclear differentiation process, antigen appearance time, morphology, large nuclear primordia differentiation, antigen appearance, large nuclear primordia nuclear membrane No small nuclear plant and large nuclear antigen exist, antigen and large nuclear antigen appear. 5. The immune function of the antigen is regulated in detail, and the antigenicity is lost. Refined antigens are injected into the system, and different antigen determinants are selected.

项目成果

Masahiro Fujishima: "Costimulation-Induced Rounding in Tetrahymena thermophila:Early Cell Shape Transformation Induced by Sexual Cell-to- Cell Collisions between Complementary Mating Types" Developmental Biology. 155. 198-205 (1993)

Masahiro Fujishima：“共刺激诱导的嗜热四膜虫变圆：互补交配类型之间的性细胞间碰撞诱导的早期细胞形状转变”发育生物学。

Manabu Hori: "Identitication of Ciliary Membrane Proteins Closely Related with the Mating Reactivity of Paramecium caudatum." Acta Protozoologica. 31. 151-157 (1992)

Manabu Hori：“鉴定与尾草履虫交配反应密切相关的纤毛膜蛋白。”

Masahiro Fujishima: "Developmental Expression of Macronuclear Specific Antigen in Paramecium caudatum" Developmental Genetics. 13. 53-57 (1992)

Masahiro Fujishima：“尾草履虫大核特异性抗原的发育表达”发育遗传学。

Masahiro Fujishima: "Meiosis-Reinitiation-Inducing Factor of Tetrahymena Functions Upstream of M-phase- Promoting Factor." Journal of Protozoology. 39. 683-690 (1992)

Masahiro Fujishima：“四膜虫减数分裂重新启动诱导因子在 M 相促进因子上游发挥作用。”