核膜を識別する核内共生細菌ホロスポラの全ゲノム塩基配列の解読と機能開発

破译内共生细菌全孢菌的全基因组序列和功能发育，识别核膜。

• 批准号: 13206057
• 负责人: 藤島 政博
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13206057/
• 关键词: 核内共生細菌; ホロスポラ; ゾウリムシ; 細胞内共生; プロテオーム; ゲノミクス; モノクローナル抗体

グラム陰性細菌ホロスポラ属は、繊毛虫ゾウリムシ属の特定種の小核か大核(多細胞生物の生殖核と体細胞核に相当)に感染して増殖し、宿主外では増殖できない核内共生細菌である。我々は、ホロスポラの特殊能力(宿主食胞からの脱出、宿主アクチンの重合による細胞質内移動、標的核膜の識別と核膜貫、宿主の栄養状態に合わせた形態変化、宿主の特定遺伝子発現の促進と抑制)を調節する遺伝子とその産物を検出することを目的として、大核特異的なホロスポラ・オプツサの(1)網羅的タンパク質の部分アミノ酸配列の決定、(2)抗体を用いた抗原の細胞内局在性・生活環での量的変化と宿主細胞への分泌の有無、(3)全ゲノム塩基配列の解読と上記(1)の部分アミノ酸配列をコードするORFの検出等を行った。その結果、下記のことが明らかになった。・ホロスポラ・オブツサの感染によって宿主の細胞表層抗原の遺伝子の発現が完全に抑制されることを明らかにし、この抗原に対するモノクローナル抗体を作成し、間接蛍光抗体法とイムノプロットでホロスポラ・オブツサの感染によって宿主抗原の消失を確認した。・ホロスポラ・オブツサの標的核膜貫通部位に対するモノクローナル抗体を作成した。・2D-SDS-PAGEゲルからホロスポラ・オブツサの主なタンパク質50種を網羅的に精製し、プロテインシーケンサで部分アミノ酸配列を調べ、ホモロジー検索を行った。・新種のホロスポラを発見した。

The microkaryon and macrokaryon (reproductive nucleus and somatic nucleus equivalent of multicellular organisms) of certain species of genus Caterpillars are infected with and proliferate outside the host. I am a special ability.(host cytokinesis, host cytokinesis, target nuclear membrane recognition and nuclear membrane penetration, host maintenance state morphological change, host specific gene production promotion and inhibition) regulate the production of gene products, target and target, macronucleus-specific cytokinesis, macronucleus-specific cytokinesis, and (1) the determination of acid alignment in part of the target cytokinesis.(2) the change of the intracellular localization and amount of antigen in the life cycle of antibody use and the presence or absence of secretion of host cell,(3) the resolution of complete nucleotide sequence and the expression of partial nucleotide sequence in (1) above. The result of the test, the next record, the next record, the next record. The expression of antigen on the surface of host cells was completely inhibited by the infection of host cells. The production of antibody against antigen was confirmed by indirect fluorescent antibody method. The nuclear membrane penetration site of the target is prepared by 2D-SDS-PAGE analysis of 50 kinds of samples collected from different regions of China A new species of fish was discovered.

项目成果

藤島政博: "第2章 細胞.生物学入門(大学生のための基礎シリーズ2)"東京化学同人. 283 (2001)

藤岛正宏：“第2章细胞生物学概论（大学生基础系列2）”东京化学同人283（2001）。

I.N.Skovorodkin, S.I.Fokin, M.Fujishima: "Fates of the endonuclear symbiotic bacteria Holospora obtusa and Holospora undulata injected into the macronucleus of Paramecium caudatum."Europ. J. Protistol.. 237・2. 137-145 (2001)

I.N.Skovorodkin、S.I.Fokin、M.Fujishima：“注入草履虫大核的核内共生细菌 Holospora obtusa 和 Holospora undulata 的命运”。Europ. J. Protistol.. 137・145 (2001)。

M.Sugii, M.Fujishima: "Purification of GVBD-inducing protein from the ciliate Tetrahymena thermophila."J. Eukaryot. Microbiol.. 48・4. 414-424 (2001)

M.Sugii，M.Fujishima：“从纤毛虫嗜热四膜虫中纯化 GVBD 诱导蛋白。” J. Eukaryot.. 48・4 (2001)。