核膜を識別する核内共生細菌ホロスポラの全ゲノム塩基配列の解読と機能開発

破译内共生细菌全孢菌的全基因组序列和功能发育，识别核膜。

• 批准号: 13206057
• 负责人: 藤島 政博
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13206057/
• 关键词: 核内共生細菌; ホロスポラ; ゾウリムシ; 細胞内共生; プロテオーム; ゲノミクス; モノクローナル抗体

グラム陰性細菌ホロスポラ属は、繊毛虫ゾウリムシ属の特定種の小核か大核(多細胞生物の生殖核と体細胞核に相当)に感染して増殖し、宿主外では増殖できない核内共生細菌である。我々は、ホロスポラの特殊能力(宿主食胞からの脱出、宿主アクチンの重合による細胞質内移動、標的核膜の識別と核膜貫、宿主の栄養状態に合わせた形態変化、宿主の特定遺伝子発現の促進と抑制)を調節する遺伝子とその産物を検出することを目的として、大核特異的なホロスポラ・オプツサの(1)網羅的タンパク質の部分アミノ酸配列の決定、(2)抗体を用いた抗原の細胞内局在性・生活環での量的変化と宿主細胞への分泌の有無、(3)全ゲノム塩基配列の解読と上記(1)の部分アミノ酸配列をコードするORFの検出等を行った。その結果、下記のことが明らかになった。・ホロスポラ・オブツサの感染によって宿主の細胞表層抗原の遺伝子の発現が完全に抑制されることを明らかにし、この抗原に対するモノクローナル抗体を作成し、間接蛍光抗体法とイムノプロットでホロスポラ・オブツサの感染によって宿主抗原の消失を確認した。・ホロスポラ・オブツサの標的核膜貫通部位に対するモノクローナル抗体を作成した。・2D-SDS-PAGEゲルからホロスポラ・オブツサの主なタンパク質50種を網羅的に精製し、プロテインシーケンサで部分アミノ酸配列を調べ、ホモロジー検索を行った。・新種のホロスポラを発見した。

革兰氏阴性细菌是肉虫是核共生细菌，当感染了微核酸或大核（对应于生殖核和特定纤毛的特定物种的生殖核和体细胞核）时，会增殖，并无法从宿主外群体中脱离宿主的特殊能力。 phagocytosis, cytoplasmic migration through host actin polymerization, identification and nuclear transmembrane, morphological changes tailored to the host's nutritional status, promotion and suppression of the expression of specific genes in the host), we conducted (1) determination of the partial amino acid sequence of the comprehensive protein of horospora optus, which is specific to macronuclear, (2) the presence or absence of antigens in the subcellular localization and quantitative changes in the life cycle and secretion into the host cell using antibodies, (3) decoding the whole genome nucleotide sequence and detection of ORFs encoding the partial amino acid sequence of (1) above. The results revealed the following: -We have revealed that infection with Horospora obtusa completely suppresses the expression of the genes of the host cell surface antigen, and a单克隆抗体是针对这种抗原的，间接荧光免疫吸附测定法和免疫斑点证实了通过用horospora obtusa感染宿主抗原的消失 - 对单核抗体的抗体是针对Horospora obspora priper ofter ofter purrus ofter purrus ofter perrus ofter的。凝胶和部分氨基酸序列使用蛋白质测序仪进行了检查，并进行了同源性搜索。