核膜を識別する核内共生細菌ホロスポラの全ゲノム塩基配列の解読と機能開発

破译内共生细菌全孢菌的全基因组序列和功能发育，识别核膜。

• 批准号: 12206066
• 负责人: 藤島 政博
• 金额: --
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12206066/
• 关键词: 核内共生細菌; ホロスポラ; プロテオーム解析; ゾウリムシ; 細胞内共生; 遺伝子発現; ターゲッティング; ストレス応答

1.ホロスポラ・オブツサのゲノムは現在までに約60%(ゲノムサイズ約1.7Mbp)が解読された。2D-SDS-PAGEゲルの18種のスポットの部分アミノ酸配列を決定し、解読済みゲノム部分にORFがあるかどうかと既知タンパク質とのidentityの有無を調べた。その結果、ORFが見つかったのは3種のみ、高いホモロジーが確認されたのは8種であった。解読済みゲノム部分(60%)にORFが3/18(17%)しか検出されないことは、宿主から輸入したタンパク質が多いことを示唆している。2.ディファレンシャルディスプレー法で、ホロスポラによって発現が抑制される宿主遺伝子を12種、発現が増加する遺伝子を3種検出し、前者のうちの4種の遺伝子断片のシーケンスを行った。その1種は、真核細胞核で最初のコドン逸脱性の発見になったにもかかわらず機能が不明のままになっていたイモビリゼーションアンチジェンA遺伝子であった。ノーザンブロットでも、この遺伝子発現がホロスポラの感染によって抑制されることが確認された。3.ホロスポラが細胞外膜に露出させている標的核膜識別センサー(リポ多糖)を精製した。4.ホロスポラの標的核膜貫通部位に特異的なモノクローナル抗体を1種類作成し、抗原の性質を調べた。

1。迄今为止，已解密了大约60％的Holospora otusa基因组（基因组大小约1.7 Mbp）。确定了2D-SDS-PAGE凝胶上18个斑点的部分氨基酸序列，并测试了解密基因组部分中ORF的存在以及与已知蛋白质的同一性。结果，仅发现了三种ORF，同时确认了八种高度同源性。在解密的基因组部分中仅检测3/18（17％）ORF（60％）表明从宿主进口许多蛋白质。 2。使用差分显示方法，12个宿主基因被Horospora抑制的表达，并且检测到3个表达的基因，并测序了前者的四个基因片段。其中之一是固定化抗原A基因，尽管在真核细胞核中首次发现密码子偏差，但其功能仍然未知。 Northern印迹还证实，该基因表达被Horospora感染抑制了。 3。纯化了Horospora暴露于外细胞膜的靶核膜鉴定传感器（脂多糖）。 4。准备对Horospora的靶核经跨传道特异的单克隆抗体进行检查，以检查抗原的性质。

项目成果

Miki Kawai: "Invasion of the macronucleus of Paramecium caudatum by the bacterium Holospora obtusa Fates of the bacteria and timings of invasion steps."European Journal of Protistology. 36. 46-52 (2000)

Miki Kawai：“Holospora obtusa 细菌对尾草履虫大核的入侵。细菌的命运和入侵步骤的时间。”欧洲原生学杂志。

Ilya N,Skovorodkin: "Fates of the endonuclear symbiotic Holospora obtusa and Holospora undulata Injected into the macronucleus of Paramecium caudatum"European Journal of Protistology. (印刷中). (2001)

Ilya N，Skovorodkin：“注射到尾草履虫大核中的核内共生 Holospora obtusa 和 Holospora undulata 的命运”欧洲原生学杂志（2001 年）。

Manabu Sugii: "Purification of GVBD-inducing proteins from Tetrahymena thermophila"Journal of Eukaryotic Microbiology. (印刷中). (2001)

Manabu Sugii：“从嗜热四膜虫中纯化 GVBD 诱导蛋白”，《真核微生物学杂志》（出版中）。

Eriko Oosaki: "Purification of germinal-vesicle-breakdown-inducing proteins from Tetrahymena pyriformis"European Journal of Protistology. 36. 459-464 (2000)

Eriko Oosaki：“从梨形四膜虫中纯化生发囊泡分解诱导蛋白”欧洲原生学杂志。