核膜を識別する核内共生細菌ホロスポラのプロテオーム解析と特殊機能の応用開発

识别核膜的内共生细菌Holospora的蛋白质组分析及特殊功能的应用开发

• 批准号: 14014237
• 负责人: 藤島 政博
• 金额: $ 3.14万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14014237/
• 关键词: 核内共生細菌; ホロスポラ; ゾウリムシ; プロテオーム解析

1)感染型ホロスポラ・オブツサの片方の末端に存在する標的核膜貫通部位に特異的なモノクローナル抗体の作成に成功した。間接蛍光抗体法では、標的核膜貫通部位の内部構造に抗原が存在することが明らかになった。抗原を2D-SDS-PAGEゲルから精製し、部分アミノ酸配列を解析し、解読済ゲノムからそのORFの検出を試みたが解読済の65%にはORFが存在しなかった。したがって、残り35%のゲノムに存在するか、または宿主から輸入されたものである可能性がある。核膜貫通機能を持つタンパク質の可能性を予測して、生活環での抗原の出現時期と感染過程での抗原の運命を、イムノブロットと免疫電顕で調べている。2)国内で採取されたミドリゾウリムシ(Paramecium bursaria)から新種のホロスポラを発見した。このホロスポラは大核特異的で、形態はHolospora bacillataに似ているが、宿主特異性及び、ホロスポラ属を2グループに分ける16S rRNAのプローブを用いたin situ hybidizationで、新種と判定された。3)ホロスポラ・オブツサの増殖型の細胞外膜特異的抗原が、ホロスポラが感染型に分化するときに、いつ消失するかを間接蛍光抗体法で明らかにした。この抗原は宿主クロマチンと接着する性質をもち、これによって増殖型は宿主の娘核に分配されることを保証される。一方、感染型にはこの抗原がないため、核分裂時に娘核には分配されず、核膜に包まれて細胞質に放出され、細胞肛門から宿主外に出される。これによって、感染型は他の宿主に感染する機会を得ている。

1）我们成功地创建了一种针对靶核跨性别区域特异性的单克隆抗体，位于感染性horospora ottusa的一端。间接荧光免疫测定表明抗原存在于靶核跨区域的内部结构中。从2D-SDS-PAGE凝胶中纯化抗原，分析部分氨基酸序列，并在解密的基因组中尝试检测ORF的检测，但不存在65％的破译ORF。因此，它可能存在于其余的35％的基因组或从宿主进口的基因组中。我们预测蛋白质具有核经体功能的可能性，并研究了使用免疫印迹和免疫电子显微镜在感染过程中生命周期中抗原外观和抗原命运的时间。 2）从日本收集的甲虫甲虫（Pramecium bursaria）发现了一种新的Horospora物种。该群虫是大核特异性的，类似于霍洛斯波拉芽孢杆菌，但由于宿主的特异性和原位知孢菌，使用16S rRNA探针被确定为一种新物种，该探针将群虫属分为两组。 3）当Horospora obtusa外膜特异性抗原的增殖消失时，当Horospora区分为传染性时，通过间接免疫荧光确定间接免疫荧光。该抗原具有粘附的粘附特性，可确保增殖形式分布在宿主的子核中。另一方面，由于传染性形式没有这种抗原，因此在核分裂过程中不会分布给子核，而是在核膜中包裹并释放到细胞质中，并从细胞肛门释放到宿主的外部。这为感染形式提供了感染其他宿主的机会。

项目成果

M Hori, M.Fujishima: "Influence of the endosymbiotic bacterium Holospora obtusa against heat-shock Resistance of the host Paramecium"J. Enkariotic Microbiol.. (In press). (2003)

M Hori，M.Fujishima：“内共生细菌 Holospora obtusa 对宿主草履虫热激抗性的影响”J。

M.Fujishima, M.Kawai: "Endonuclear symbiotic bacteria Holospora species distinguish nuclear envelopes of macro-and micronucle of the host Paramecium, ICES Proceedings"名古屋大学出版会(In press). (2003)

M.Fujishima，M.Kawai：“内核共生细菌 Holospora 物种区分宿主草履虫的大核和微核的核膜，ICES 论文集”名古屋大学出版社（2003 年）。