PQQおよびTOPAに対するモノクローナル抗体の作製とその応用

PQQ和TOPA单克隆抗体的制备及其应用

• 批准号: 04660098
• 负责人: 成田 宏史
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto Women's Junior College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04660098/
• 关键词: PQQ; モノクローナル抗体; 酵素抗体法; キノプロテイン

PQQは微生物由来の酸化還元酵素の補酵素であるが,近年マウスでPQQ欠乏症が観察されたり,PQQに抗白内障活性が示されるなど,その生理作用,薬理作用に関する研究も盛んになってきている。一方,一昨年PQQと思われていたものがTOPAであったという報告が出され,PQQ研究はその本態に関しても論争の的となっているのが現状である。本研究はPQQ,TOPAに対するモノクローナル抗体を作製し,これを用いてPQQ研究に免疫学的手法を導入し,解析することを目的とした。PQQをカコ貝ヘモシアニンにハプテン化し,これを抗原として免疫したマウスの脾臓細胞と骨髄腫細胞を融合させ,常法に従い2つのIgGと3つのIgMモノクローナル抗体を得た。競合酵素抗体法においての遊離のPQQで阻害のかかった前者に関しては,各種抗原類似体に対する結合能を解析し特異性を明らかにした。また,親和性の高いIgGを用いた競合酵素抗体法により,20nM〜2μMのPQQの微量定量が可能となった。一方,これらの5つの抗体を用いて酵素活性の中和,ウエスタンブロッティングによる解析を行い,共有結合的にPQQを持っていると報告されているモノアミン酸化酵素やアミン脱水素酵素の補欠分子の解析を行ったが,これらの酵素がPQQを持っているという証拠は得られなかった。TOPAに関しては特異的な抗体が得られなかった。今後さらに定量法を高感度化し,各種食品,生体試料中のPQQを定量する予定である。

PQQ is a complement enzyme of acidification reducing enzyme of microbial origin. In recent years, PQQ deficiency has been observed, PQQ anti-cataract activity has been shown, and its physiological and biological effects have been studied intensively. On the one hand, last year PQQ research was carried out on the basis of TOPA report,PQQ research was carried out on the basis of debate. In this study, PQQ and TOPA were used to control the immune system. PQQ is the most common type of immune system. It can be used to fuse immune spleen cells and osteoma cells. It can be used to detect IgG and IgM antibodies. Co-enzyme antibody assay is used to analyze the binding energy of free PQQ. For high affinity IgG, microquantification of PQQ from 20nM to 2μM is possible using the competitive enzyme antibody method. On the other hand, the antibody of the five groups was used to neutralize the enzyme activity, and the enzyme activity of the five groups was analyzed in the middle of the analysis process. The total binding enzyme PQQ was maintained in the middle of the analysis process, and the enzyme activity of the five groups was maintained in the middle of the analysis process. The enzyme activity of the five groups was analyzed in the middle of the analysis process. TOPA is a specific antibody. In the future, the quantitative method will be highly sensitive, and the quantitative determination of PQQ in various foods and biological samples will be determined.

项目成果

成田 宏史: "モノクローナル抗体を用いたPQQ、OPQの高感度定量法の開発" バイオサイエンスとインダストリー. 51. 237-239 (1993)

Hiroshi Narita：“使用单克隆抗体开发 PQQ 和 OPQ 的高灵敏度定量方法”《生物科学与工业》51. 237-239 (1993)。

森下 恵美: "モノクローナル抗体の作製と応用" 京都女子大学食物学会誌. 47. 1-18 (1992)

Emi Morishita：“单克隆抗体的制备和应用”京都女子大学食品科学杂志47. 1-18 (1992)。