モノクローナル抗体を用いたPQQ及びOPQの微量高感度定量法の確立

单克隆抗体高灵敏痕量定量测定PQQ和OPQ方法的建立

• 批准号: 05660149
• 负责人: 成田 宏史
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyoto Women's Junior College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05660149/
• 关键词: PQQ; OPQ; モノクローナル抗体; 酵素抗体法

PQQ(ピロロキノリンキノン)は当初、酸化還元酵素の補酵素として発見されたが、現在ではPQQに肝臓障害や白内障の予防作用があること、PQQのグレシン付加体であるOPQ(オキサゾピロロキノリン)に神経細胞増殖因子の分泌促進活性があることなどが報告され、生理・薬理学的にも注目されている化合物である。本研究はモノクローナル抗体を用いた酵素抗体法によるPQQ、OPQの微量高感度定量法の確立を目的として行った。既に取得していた5つのPQQ特異的モノクローナル抗体のうち一つ(mAb2)は競合ELISAにおいて、本来の抗原であるPQQに対するIC_<50>は270nMであったがOPQに対しては3nMであり、これは他の11種類のPQQのアミノ酸付加体で最も低いものであった。一方、PQQを0.3MNH_4Cl,0.4%グリシン、100μMCaCl_2、pH8.3で1晩反応させると、加えたPQQのほとんどがOPQ化された。つまり、試料中のPQQをOPQ化し、その前後のOPQを定量することにより両者の高感度定量が可能となった。OPQの定量法としては現在のところ本法しか報告例はない。本法を用いていくつかの生体、食品試料中のPQQ、OPQを測定したところ、PQQに関してはこれまでの報告がかなりその濃度を高く評価し過ぎていること、発酵食品や血清中にもOPQが存在していることが判明した。ただし、生体試料中のPQQ、OPQを安定して正確に定量するためにはもう1桁感度をあげる必要があり、今後ABC法、PAP法による高感度化あるいはラジオイムノアッセイの導入を考えている。

PQQ (pyrroloquinolinequinone) was initially discovered as a coenzyme for oxidoreductases, but it has now been reported that PQQ has the effect of preventing liver damage and cataracts, and that OPQ (oxazopyrroloquinoline), a glesin adduct of PQQ, has secretion-promoting activity of neuronal growth factors, and is a compound that has attracted attention both在生理和药理上。进行这项研究的目的是使用单克隆抗体建立非常敏感的，微量的定量测定PQQ和OPQ。已经获得的五种PQQ特异性单克隆抗体（MAB2）之一（MAB2）的原始抗原PQQ具有IC_ <50>，但在竞争性ELISA中，OPQ的3NM。另一方面，PQQ与0.3M NH_4CL，0.4％甘氨酸，100μMCACL_2，pH 8.3反应过夜，并且大多数添加的PQQ转换为OPQ。换句话说，通过将PQQ转换为样品中的OPQ并在此之前和之后量化OPQ，两者都可能对两者进行高度敏感的量化。当前，该方法仅报告为OPQ的定量方法。使用这种方法，测量了几种活生物体和食物样品中的PQQ和OPQ，发现先前的报道已经高度评估了PQQ的浓度，并且OPQ也存在于发酵食品和血清中。但是，为了确保在生物样品中对PQQ和OPQ进行稳定，准确的量化，有必要通过数量级来提高灵敏度，并且我们将来正在考虑通过ABC或PAP方法提高灵敏度，或引入放射免疫分子。