卵蛋白質に対するモノクロ-ナル抗体の作製とその応用

抗卵蛋白单克隆抗体的制备及其应用

• 批准号: 02680085
• 负责人: 成田 宏史
• 金额: --
• 依托单位: Kyoto Women's Junior College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02680085/
• 关键词: モノクロ-ナル抗体; 抗原決定部位; 高次構造; 変性; 卵黄膜; オボトランスフェリン; オボアルブミン

1.VMOI(Vitelline Membrane Outer I)は鶏卵卵黄膜を構成する分子量17000の蛋白質である。まず,卵黄膜からのVMOIの純化法を確立し,その全一次構造を決定した。円二色性分析の結果,本蛋白質はαーヘリックスをほとんど含まない特徴的な高次構造をとっていることが判明した。かかる構造上の特性を免疫学的に解析する目的で,常法に従いVMOIに対するモノクロ-ナル抗体を作製した。得られた6つの抗体のうち1つのエピト-プがVMOIのN末端から70〜93番のアミノ酸残基内にあることを決定した。今後他の抗体も同様に解析し,これらの部位がVMOIの高次構造上どのような意味を持つかを変性との関連において解析する予定である。2.オボトランスフェリン(OTF)に対しては5つのモノクロ-ナル抗体が得られた。OTFは,各々1つの鉄結合部位をもち構造的にもよく似た,Nー末端側,Cー末端側の2つのドメインからなっているが,5つの抗体ともNー末端側ドメインしか認識しなかった。また,これらの抗体の認識部位はトリプシン処理に対して高い感受性を有していることも判明した。OTFのNー末端側には構造上何らかの突出した部位があるのかもしれない。3.オボアルブミン(OVA)に対してはその疎水的吸着変性状態,熱変性状態を認識するモノクロ-ナル抗体が得られたが,未変性状態を認識するものは現在のところ得られていない。これはOVAが非常に変性し易い蛋白質であることから,免疫操作(アジュバンドの作製)中に変性してしまうためと考えられる。

1. VMOI (Vitelline Membrane Outer I) is a protein composed of the yolk membrane of an egg and has a molecular weight of 17,000. The purification method of the vitelline membrane and the VMOI has been established, and the complete primary structure of the vitelline membrane has been determined. As a result of dichroism analysis, it was found that this protein has a high-order structure that contains the special characteristics of the protein. The analysis of the structural characteristics and immunological purpose of the test was carried out, and the VMOI test method was used to produce the VMOI antibody. Obtained られた6つのantibodyのうち1つのエピト-プがVMOIのN-terminal から70~93 acid residues within the にあることをdeterminationした. From now on, the analysis of the same antibody and the high-order structure of VMOI will be carried outどのような means をhold つかを変性とのconnection においてanalytic するpredetermined である. 2. オボトランスフェリン(OTF)に対しては5つのモノクロ-ナルAntibody られた. OTF は, each 々1 つの鄄鄄joining part をもち structure にもよくsimilar た, N ー terminal side, C ー terminal side の2つのドメインからなっているが, 5つのantibody ともNーTerminal side ドメインしかKnow しなかった.また,これらのantibodyのcognitive partはトリプシンtreatmentに対して高いsensitivityを有していることも clarificationした. The structure of OTF's terminal side has a protruding part. 3. The adsorption and thermal properties of OVA (OVA) water absorption and thermal properties.ノクロ-ナルantibodyがgetsられたが, the unchanging state をknows するものはnow のところgets られていない.これはOVAがveryに変性しeasyいproteinであることから,immune exercise Made by アジュバンドの中に変性してしまうためと卡えられる.