卵蛋白質に対するモノクロ-ナル抗体の作製とその応用

抗卵蛋白单克隆抗体的制备及其应用

• 批准号: 02680085
• 负责人: 成田 宏史
• 金额: --
• 依托单位: Kyoto Women's Junior College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02680085/
• 关键词: モノクロ-ナル抗体; 抗原決定部位; 高次構造; 変性; 卵黄膜; オボトランスフェリン; オボアルブミン

1.VMOI(Vitelline Membrane Outer I)は鶏卵卵黄膜を構成する分子量17000の蛋白質である。まず,卵黄膜からのVMOIの純化法を確立し,その全一次構造を決定した。円二色性分析の結果,本蛋白質はαーヘリックスをほとんど含まない特徴的な高次構造をとっていることが判明した。かかる構造上の特性を免疫学的に解析する目的で,常法に従いVMOIに対するモノクロ-ナル抗体を作製した。得られた6つの抗体のうち1つのエピト-プがVMOIのN末端から70〜93番のアミノ酸残基内にあることを決定した。今後他の抗体も同様に解析し,これらの部位がVMOIの高次構造上どのような意味を持つかを変性との関連において解析する予定である。2.オボトランスフェリン(OTF)に対しては5つのモノクロ-ナル抗体が得られた。OTFは,各々1つの鉄結合部位をもち構造的にもよく似た,Nー末端側,Cー末端側の2つのドメインからなっているが,5つの抗体ともNー末端側ドメインしか認識しなかった。また,これらの抗体の認識部位はトリプシン処理に対して高い感受性を有していることも判明した。OTFのNー末端側には構造上何らかの突出した部位があるのかもしれない。3.オボアルブミン(OVA)に対してはその疎水的吸着変性状態,熱変性状態を認識するモノクロ-ナル抗体が得られたが,未変性状態を認識するものは現在のところ得られていない。これはOVAが非常に変性し易い蛋白質であることから,免疫操作(アジュバンドの作製)中に変性してしまうためと考えられる。

1.VMOI（VMOI（Vitelline膜外I）是一种蛋白质，其分子量为17,000，构成蛋黄膜。首先，建立了一种从蛋黄膜纯化VMOI的方法，并确定了它的总主要结构。圆形二色性分析表明，该蛋白具有一个特征性的高阶结构，几乎没有α-螺旋。为了通过免疫学分析这种结构特性，根据常规方法制备针对VMOI的单克隆抗体。确定获得的六种抗体之一是从VMOI的N末端70-93内的氨基酸残基内。将来，将类似地分析其他抗体，并且与变性有关，这些位点对VMOI的高阶构象具有什么意义。 2。获得五种单克隆抗体，以抗卵素铁蛋白（OTF）。 OTF每个都有一个铁结合位点，由两个结构域组成，即N末端和C端，它们在结构上相似，但所有五种抗体仅识别公认的N末端结构域。还发现这些抗体的识别位点对胰蛋白酶治疗高度敏感。 OTF的N末端可能有一些结构突出的位点。 3。已经获得了识别疏水吸附的腐蚀性和针对卵巢蛋白（OVA）的热定性状态的单胸抗体，但没有获得识别天然状态的疏水性。这被认为是因为OVA是一种高度容易变性的蛋白质，并且在免疫操作（制作佐剂）期间是变性的。