先天異常形質出現についての動物モデルを用いた分子遺伝学的研究

使用动物模型对先天性异常现象进行分子遗传学研究

• 批准号: 04670302
• 负责人: 遠藤 晃
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670302/
• 关键词: XOマウス; Zfx; Rps4; 遺伝子発現

ヒトのXO個体であるターナー症候群とXOマウスではその表現型に大きな違いが見られる。この違いは、X染色体上の遺伝子の発現様式の違いに起因する可能性がある。本研究は、ヒトTurner症候群と関連が深いと考えられている遺伝子、ZFXおよびRPS4XのマウスホモローグZfxおよびRps4について、XOマウス及びXXマウス間でノーザンブロット法を用いてmRNA量の比較をおこない、転写レベルでの発現様式を知ることを目的としたものである。当教室で樹立、維持しているXOマウスコロニー(Jcl:ICR由来)のXXマウス肝臓より、oligo-d(T)セルロースを用いmRNAを精製した。このmRNAを用い、RT-PCR法によりZfxおよびRps4の遺伝子断片を増幅し、これをpUC118に組み込んで組み換えDNAを作成し、大腸菌DH5αを用いてクローニングを行った。クローニングした遺伝子断片については塩基配列を決定して目的遺伝子断片であることを確認した。この遺伝子断片をrandom priming法により^<32>Pでラベルしてノーザンブロッティングのプローブとした。現在、ノーザンブロッティングによるmRNAの定量を行っている最中であり、未だ最終的な結果を得る段階にはきていない。XOおよびXXマウスの肝臓、腎臓および脾臓から、AGPC法によりtotal RNAを精製した。これらのRNAをホルムアルデヒド変性化で電気泳動後、ナイロンメンブレンに転写した。このメンブレンに対し上記のプローブを用いてハイブリダイゼーションを行い、オートラジオグラフィーによりシグナルの検出を行っている。シグナルの定量はX線フィルムの像をスキャナーで取り込み、MacintoshIIおよびNIH Imageを用い画像解析により行っており、厳密な比較ができると考えられる。

Individual ヒ ト の XO で あ る タ ー ナ ー syndrome と XO マ ウ ス で は そ の phenotype に big き な violations い が see ら れ る. The occurrence pattern of the 伝 offspring of the 伝 on the X chromosome, the に に cause する possibility がある. は, this study ヒ ト Turner syndrome と masato even が deep い と exam え ら れ て い る heritage 伝, ZFX お よ び RPS4X の マ ウ ス ホ モ ロ ー グ ZFX お よ び Rps4 に つ い て, XO マ ウ ス and び XX マ ウ ス between で ノ ー ザ ン ブ ロ ッ を ト method with い て amount of mRNA の is を お こ な い, planning to write レ ベ ル で の 発 others now The formula を reveals that る とを とを とを the purpose is と <s:1> た た である である である である. When the classroom で set up and maintain し て い る XO マ ウ ス コ ロ ニ ー (Jcl: ICR origin) の XX マ ウ ス routine liver よ り, oligo - d (T) セ ル ロ ー ス を with い mRNA を refined し た. こ の mRNA を い, rt-pcr method に よ り Zfx お よ び Rps4 の posthumous son 伝 fragment を raised し, こ れ を pUC118 に group み 込 ん み で group in え DNA を make し, coliform DH5 alpha を with い て ク ロ ー ニ ン グ を line っ た. ク ロ ー ニ ン グ し た posthumous son 伝 fragment に つ い て は salt base with column を decided し て purpose heritage 伝 son fragment で あ る こ と を confirm し た. こ の posthumous son 伝 fragment を random priming method に よ り ^ < > 32 P で ラ ベ ル し て ノ ー ザ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ の プ ロ ー ブ と し た. Now, ノ ー ザ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ に よ る mRNA の quantitative を line っ て い る in most で あ り, the result of not だ final な を る Duan Jie に は き て い な い. XOおよびXX ウス ウス <s:1> liver, kidney および spleen ら ら AGPC method によ た total RNAを refining た た. こ れ ら の RNA を ホ ル ム ア ル デ ヒ ド で 気 swimming after, a - gender ナ イ ロ ン メ ン ブ レ ン に planning write し た. こ の メ ン ブ レ ン に し seaborne written の プ ロ ー ブ を with い て ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン を い, オ ー ト ラ ジ オ グ ラ フ ィ ー に よ り シ グ ナ ル の 検 を row っ て い る. シ グ ナ ル の は X-ray quantitative フ ィ ル ム の like を ス キ ャ ナ ー で take り 込 み, MacintoshII お よ び NIH Image を portraits with い parsing に よ り line っ て お り, 厳 な compare が で き る と exam え ら れ る.