器官培養脊髄前角ニューロンに対するグルタミン酸アンタゴニストの神経毒性とその機序

谷氨酸拮抗剂对器官培养脊髓腹角神经元的神经毒性及其机制

• 批准号: 04670490
• 负责人: 西田 善彦
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670490/
• 关键词: グルタミン酸アンタゴニスト; 興奮性アミノ酸; グルタミン酸; NMDA; 神経細胞死; 脊髄培養; 脊髄前角細胞

研究計画に従い本年度に次のような成果が得られた.1.ラット脊髄器官培養:生後6‐7日のラットを断頭屠殺し,ティッシュチョッパーにより厚さ400μmの腰髄切片を得た.各切片をカバースリップ上に固定し,37℃で回転培養した.培養開始2週間後に主な組織構築を保ったまま1‐3層に薄層化した培養組織を得ることに成功した.2.グルタミン酸アンタゴニストの作用:NMDAアンタゴニストのうち競合的アンタゴニストであるD‐AP5およびCPPあるいは非競合的アンタゴニストであるMK‐801を培養組織に72時間作用させたのち,アセチルコリンエステラーゼ(AChE)染色を行い,AChE陽性脊髄前角ニューロン(VHAN)に対する毒性の定量をモルフォメトリーによりVHANの断面積別に行った.500μMのD‐AP5添加群と10μMのMK‐801添加群はコントロール群に比べVHANの有意な減少を認めたが,200μMのCPP添加群ではコントロール群との間に有意差は認められなかった.一方,non‐NMDAアンタゴニストについては200μMのCNQXを作用させたが,コントロール群,CNQX添加群とも培養組織が脱落傾向を示した.3.作用機序の検討:D‐AP5やMK‐801などのNMDAアンタゴニストは,non‐NMDAアゴニストであるKainateやquisqualateと同様に100μm^2以上の大きさのVHANを障害し,0ー100μm^2のVHANを主に障害するNMDAの神経毒性とは異なっていた.NMDAアンタゴニストによる神経障害の作用機序としては,1)NMDAレセプターを介したグルタミン酸の神経細胞に対する必要不可欠な作用の阻害,2)NMDAレセプター阻害によるnon‐NMDAレセプターの二次的な賦活化などが考えられた.これらの鑑別には,NMDAアンタゴニストの神経毒性とnon‐NMDAアンタゴニスト単独添加ならびにNMDAアンタゴニストとnon‐NMDAアンタゴニストの複合添加の場合の神経毒性との比較が必要と考えられる.

The results of the current year's research project are as follows: 1. Organ culture of the spine: decapitation and massacre on 6-7 days after birth, Cut off the 400μm thick slices of the ティッシュチョッパーにより thick slices. Each slice is fixed on the をカバースリップ and cultured at 37℃.した. Two weeks after the start of culture, the main tissue construction was carried out and the 1-3 layers were thinned. The cultured tissue was successfully completed. 2. グルタNMDA アンタゴニストの Function: NMDA アンタゴニストのうアンタゴニストであるD-AP5 およびCPPあるいは Non-competing アンタゴニストであるMK-801を cultured tissue に72 time action させたのち, アセチルコリンエステラーゼ(AChE) staining, AChE-positive spinal cord anterior horn ニューロン (VHAN) に対するtoxicity をモルフォメトリーによりVHAN's cross-sectional area is different. 500μM D-AP5 added group and 10μM MK-801 added group used. VHAN's intention is to reduce the risk, and 200 μM of CPP is to add a group of people's health. One side,non-NMDAアンタゴニストについては200μMのCNQXをactionさせたが,コントロールgroup,CNQX The tendency of shedding of cultured tissue after adding the group has been shown. 3. The mechanism of action: D-AP5 MK-801 NMDA アンタゴニストは,non-NMDAアゴニストであるKainateやquisqualateと同様に100μm^2 or aboveの大きさのVHANをhurtし,0ー100μm^2のVHANを主に狠するNMDAの神経toxicityとはdifferentなっていた.NMDAアンタゴニストによる神経 hindering mechanism sequence としては,1) NMDARるNecessary and indispensable な effect の hindrance, 2) NMDA レセプター ND によるnon-NMDA レセプターのsecondary な富activation などがKaoえられた.これらのidentificationには,NMDAアンタゴニストの神経toxicityとnon-NMDAアンタゴニスト単 unique addedならびにNMDA アンタゴニストとnon-NMDA アンタゴニストのcompound addition のoccasion の神経toxicity との综合がと考えられる.

项目成果

西田 善彦: "Beta-N-methylamino-l-alanine (L-BMAA)の神経細胞に対する毒性の研究" 臨床神経学. 32. (1992)

Yoshihiko Nishida：“β-N-甲氨基-L-丙氨酸（L-BMAA）对神经细胞的毒性研究”《临床神经病学》32。（1992）

H.Kawai: "HTLV-I-associated myelopathe (HAM) in Tokushima Prefecture-geographical and clinical studies in an area between endemic and nonendemic areas of HTLV-I infection" Japanese Journal of Medicine. 30. 534-541 (1991)

H.Kawai：“德岛县 HTLV-I 相关脊髓病 (HAM)——HTLV-I 感染流行区和非流行区之间的地理和临床研究”《日本医学杂志》。

H.Kawai: "Decrease in urinary excretion of 3-methylhistidine by patients with Duchenne muscular dystrophy during glucocorticoid treatment" Journal of Neurology. 240. (1993)

H.Kawai：“糖皮质激素治疗期间杜氏肌营养不良症患者尿中 3-甲基组氨酸排泄减少”《神经病学杂志》。