血管壁プロスタサイクリン合成酵素の構造決定とトランスゲニックラット作成の試み

血管壁前列环素合酶的结构测定及转基因大鼠的构建尝试

• 批准号: 04670516
• 负责人: 上原 誉志夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670516/
• 关键词: プロスタサイクリン; プロスタサイクリン合成酵素; 血管平滑筋細胞; 高血圧自然発症ラット; トランスジェニックラット; 形質変換; プロスタグランジン; 高血圧

われわれは、高血圧の進展とともに血管壁プロスタサイクリン合成が増大することを報告してきた。プロスタサイクリン合成酵素活性の測定系を確立し、プロスタサイクリン産生における各種酵素の関与について検討したが、高血圧時の血管壁プロスタサイクリン産生の増大にはフォスフォリパーゼ活性よりもプロスタサイクリン合成酵素の活性増大が関連することをみいだした。高血圧の発症機序によらず、血圧の上昇は常に血管壁プロスタサイクリン合成酵素活性の増大を伴うことから、持続的な血行力学的刺激が本酵素活性の増大を生じるものと結論された。酵素学的解析からは本活性の増大は主に酵素の活生化よりも酵素自体の誘導による可能性が示唆された。プロスタサイクリン合成酵素の誘導については、血管平滑筋培養細胞を用いても検討された。血管平滑筋細胞増殖時にはプロスタサイクリン産生の増加がみられるが、プロスタサイクリン合成酵素活性の誘導が一部関与することが観察された。一連の研究から、高血圧発症時の血管壁にはプロスタサイクリン合成酵素の含量が多いことが推測され、プロスタサイクリン合成酵素の精製には高血圧発症時の高血圧自然発症ラット大動脈壁を用いるのが有用と考えられた。精製は、イオン交換、ゲル濾過法及び等電点クロマトフォーカシング法を用いた。またそれに平行し、平滑筋細胞への導伝導入における基礎的検討を行った。指数減衰波パルス法では、平滑筋細胞は400V、35-100μFの電撃で15-20分間にわたり細胞膜透過性が亢進し、外液中の遺伝子が導入されることが明らかにされた。その後本細胞は通常の細胞機能を持続し、導入された因子の作用の発現がみられることが確認された。今後、精製とクローニングを進め、プロスタサイクリン合成酵素遺伝子の導入による血管平滑筋細胞の形質変換について検討する予定である。

わ れ わ れ は, high blood 圧 の progress と と も に hemal wall プ ロ ス タ サ イ ク リ ン synthetic が raised large す る こ と を report し て き た. プ ロ ス タ サ イ ク リ の ン synthesis enzyme activity determination を established し, プ ロ ス タ サ イ ク リ ン produce に お け る various enzymes の masato and に つ い て beg し 検 た が, when high blood 圧 の hemal wall プ ロ ス タ サ イ ク リ ン の raised effect に は フ ォ ス フ ォ リ パ ー ゼ active よ り も プ ロ ス タ サ イ ク リ の ン synthesis enzyme activity raised large が masato even す る こ と を Youdaoplaceholder0 み だ た た. High blood 圧 の 発 disease machine sequence に よ ら ず, blood 圧 の rise は often に hemal wall プ ロ ス タ サ イ ク リ ン synthesis enzyme activity の raised big を partner う こ と か ら, hold 続 な blood line mechanical stimulation が born this enzyme activity の raised large を じ る も の と conclusion さ れ た. The analysis of enzymology: ら ら ら the activity of this <s:1> increases the activity of the main に enzyme <e:1>. The biochemical activity is よ and the autologous <s:1> induction of the enzymatic enzyme による. Youdaoplaceholder4 indicates the された. Youdaoplaceholder0 プロスタサ リ リ リ <s:1> synthetic enzymes are used to induce に て て て, vasosmoothing tendon culture cells を are used to obtain された by て て 検 検 検 検 検 検 検 検. Vascular smooth muscle cells were raised colonization に は プ ロ ス タ サ イ ク リ ン produce の raised plus が み ら れ る が, プ ロ ス タ サ イ ク リ ン synthesis enzyme activity induced が の a masato and す る こ と が 観 examine さ れ た. For の research か ら, high blood 圧 発 disease when の hemal wall に は プ ロ ス タ サ イ ク リ ン が の synthetic enzyme content more い こ と が speculation さ れ, プ ロ ス タ サ イ ク リ ン synthetic enzyme の refined に は high blood 圧 発 disease when の natural 発 disease high blood 圧 ラ ッ ト を artery wall with い る の が useful と exam え ら れ た. The refined <s:1>, <s:1> <s:1> exchange, ゲ <s:1> filtration and び isoelectric point <s:1> ロ, トフォ カシ and カシ グ グ methods are used for を た た. Youdaoplaceholder0 parallel またそれに, smooth fascia cells へ, <s:1> guide 伝 into における base 検 を line った. Method of exponential damping wave パ ル ス で は は 400 v, smooth muscle cells, 35-100 - u F の electric shock で between 15 to 20 points に わ た り cell membrane permeability が hyperthyroidism し, outside liquid of の heritage 伝 son が import さ れ る こ と が Ming ら か に さ れ た. After そ そ, this cell そ usually has the <s:1> cell function を with 続 を and the introduction of された factor <e:1> effect <e:1> occurs がみられる とが とが とが confirmation された. In the future, the refined と ク ロ ー ニ ン グ を め, プ ロ ス タ サ イ ク リ ン synthetic enzyme heritage 伝 son の import に よ る vascular smooth muscle cell の form quality variations in に つ い て beg す 検 る designated で あ る.

项目成果

Yoshio Uehara: "Radical scavenging properties of cicletanine and renal protection in Dahl salt sensitive rats" American Journal of Hypertension. (1993)

Yoshio Uehara：“环氯丹宁的自由基清除特性和对达尔盐敏感大鼠的肾脏保护”美国高血压杂志。

Yoshio Uehara: "OPC-13340,a new dihydropyridine calcium channel blocker attenuates rapid vascular smooth muscle cell growth in spontaneously hypertensive rats" Journal of Gardiovascular Pharmacology. 20. 408-415 (1992)

Yoshio Uehara：“OPC-13340，一种新型二氢吡啶钙通道阻滞剂，可减弱自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的快速生长”《心血管药理学杂志》。

Toshihiko Ishimitsu: "Interferon gamma attenuates hypertensive renal injury in salt-induced Dahl rats" Hypertension. 19. 804-808 (1992)

Toshihiko Ishimitsu：“干扰素 γ 可减轻盐诱导的 Dahl 大鼠的高血压肾损伤” 高血压。

Taiji Nagata: "Regulatory effect of thromboxane A2 on proliferation of vascular smooth muscle cells from rats" Americal Journal of Physiology. 263. H1331-H1338 (1992)

Taiji Nagata：“血栓素 A2 对大鼠血管平滑肌细胞增殖的调节作用”美国生理学杂志。

Yoshio Uehara: "Radical scavenging properties of indapamide and renal protection in Dahl salt-sensitive rats" Hypertension Research. 15. 17-26 (1992)

Yoshio Uehara：“吲达帕胺的自由基清除特性和达尔盐敏感大鼠的肾脏保护”高血压研究。